橄欖綠鏈霉菌細胞膜中幾丁單、寡糖結合蛋白質的分離、純化和結合動力學

摘要　橄欖綠鏈霉菌細胞膜中存在能與N2乙酰葡糖胺特異性結合的蛋白質。采用超聲波破碎、超速離心等方法, 分離得到細胞膜后用Triton X2100 抽提, 經連續的陰離子層析后, 可分別得到能與N2乙酰葡糖胺特異性結合的46. 0 kD 和47. 5 kD 蛋白質。底物競爭結合實驗證實, 這兩種蛋白質還能與其他幾丁質降解產物(幾丁二糖至幾丁六糖) 特異性結合而不與葡萄糖、纖維二糖等結合。采用介質表面感應技術(surface plasmon resonance) 檢測出46 kD 蛋白質與幾丁單糖至幾丁六糖的解離常數( Kd) 在8. 29 ×10 - 9～1. 95 ×10 - 5 mol/ L 之間, 單糖最高而三糖最低。決定其差異的主要因子是底物結合速率( Kon) 而非解離速率( Koff ) 。N 末端氨基酸序列分析結果推測, 該蛋白質屬于一個潛在的ATP 結合轉運系統。