作者:宣偉東，卞俊，曾華武，肖靖
摘 要：目的建立海蟑螂中藥理作用成分腺苷的含量測定方法。方法海蟑螂全體經37℃水溫浸提取，硅膠薄層層析分離，用紫外分光光度法于260nm處測定腺苷吸光度。結果在1.O～2O.0μg/mL的范圍內腺苷的濃度和吸光度呈良好線性關系(r=O.9998，n=6)，平均回收率為99.3%(RSD=1.9%，n=3)。結論本法簡捷、準確，適用于海蟑螂中腺苷的含量測定。
Determination of adenosine in Ligia exotica with ultraviolet spectrophotometry
XUAN Wei—dong，BIAN Jun，ZENG Hua—WU，XEAO Jing
Abstract：Objective To establish a UV method of determination of adenosine in Ligia exotica.Methods Adenosine was extracted with 37℃ water and separated by TLC silica gel。the absorbance was detected at 260nm with UV spectrophotometry.Results The cabibration curve for adenosion was linear within the range of 1.O～20.Og/mL，r=0.9998(n=6)，the average recovery was 99.3，RSD=1.9%(n=3).Conclusion The method was simple，convenient and accurate for determination of adenosine in Ligia exotica.
Key words：Ligia exotica;adenosine;ultraviolet spectrophotometry assay
海蟑螂Ligia exotica(Roux)屬甲殼綱，海蟑螂科，又名海蛆、海岸水虱，水陸兩棲，長年生活在海岸邊。有消積、活血、解毒之功效。在沿海地區民間常以海蟑螂為主藥，經瓦焙干炮制后，采用口服或外敷，用于跌打損傷、消腫止痛，或治小兒疳積、癰瘡腫毒。本中心曾對海蟑螂的藥理活性進行研究，其提取液經動物實驗證明具有顯著的消炎止痛作用。經對其有效部位進行成分分析表明，海蟑螂全體中含有較高的腺苷成分，可能與其藥理活性有關。本文采用紫外分光光度法測定海蟑螂中腺苷的含量，為海蟑螂的藥用開發提供質量控制依據。
1 儀器與試藥
島津UV-240紫外分光光度計;海蟑螂采集自浙江舟山市沿海，經本中心蔡定國主任藥師鑒定為節肢動物門，甲殼綱，海蟑螂科海蟑螂Ligia exotica(Roux)，其全體經冷凍干燥后研細成粉;腺苷標準品(A2海奧伯生物公司進口分裝);薄層層析硅膠板GF254(青島海洋化工廠)。
2 方法與結果
2.1 標準樣品溶液的制備
精密稱取腺苷標準品25mg，加入蒸餾水溶解，轉移至250mL容量瓶中，定容即得。
2.2 測試樣品溶液的制備
精密稱取海蟑螂粉末1.Og，置20mL燒瓶，加入蒸餾水10mL，于37℃水浴中溫浸24h，過濾，殘渣加蒸餾水10mL再溫浸24h，過濾，合并濾液，4O℃真空干燥濃縮至約lmL，轉移至2mL容量瓶，蒸餾水定容得海蟑螂提取液。用微量注射器取該提取液80μL，點樣于10×20cm薄層硅膠板上，以氯仿-醋酸乙酯-異丙醇-水(8：2：6：0.5)為展開劑，腺苷標準品為對照，直立上行展開。紫外燈下檢測后，刮取與標準樣品Rf值一致的斑點硅膠，置10mL帶蓋試管，精密加入5mL蒸餾水，劇烈振搖2min后，以3000r/min 離心30min，小心吸取上清液，即得測試樣品溶液。標準樣品溶液和測試樣品溶液在200～320nm范圍內進行紫外掃描得紫外圖譜，由圖可知樣品紫外吸收圖和標準樣品重合良好，表明樣品中其他成分對吸光度幾乎無干擾。
2.3 線性關系
精密量取標準品溶液，配制成濃度分別為1.0，4.0，8.0，12.0，16.0，20.Oμg/mL的腺苷溶液，以蒸餾水為參比，于260nm處測定吸光度。以濃度(g/mL)為縱坐標Y，吸光度為橫坐標X，繪制標準曲線，回歸后得濃度-吸光度線性方程：Y=17.2406X-0.2323r=0.9998顯示在1.O～2O.Oμg/mL的范圍內，腺苷的濃度和吸光度呈現良好的線性關系。
2.4 精密度與穩定性試驗
取腺苷標準品溶液，加水配制成濃度為5μg/mL，以水為參比，于260nm處測定吸光度。重復平行測定5次，得到吸光度值RSD為0.62%。另取該腺苷標準品溶液，以水為參比，每隔lh測定吸光度，重復平行測定9次，得吸光度的RSD為0.61%。結果顯示本試驗方法精密度良好，標準品溶液在8h內有較好的穩定性。
2.5 樣品測定
按測試品溶液制備方法制備3批測試品，以水為參比，于260nm處測定吸光度值。另取含量分別為2.0，6.0μg/mL的腺苷標準品溶液，依法測定吸光度，以外標二點法計算得到測試品腺苷濃度，經換算得海蟑螂中腺苷的含量。
2.6 加樣回收率試驗
取已知腺苷含量的海蟑螂粉末(批號：021126)1.0g，共3份，精密稱量，加入腺苷標準品，按測試品溶液的制備方法提取并制備測試液，按樣品測定方法測定吸光度并求得腺苷含量，計算回收率。RSD為1.9%。
3 討論
本文采用硅膠薄層層析結合紫外分光光度法測定了海蟑螂中腺苷的含量。海蟑螂活性成分經溫浸提取，薄層層析分離后得到的測試品溶液和標準品溶液的紫外吸收圖譜完全一致，表明測試品溶液中主要成分為腺苷，可以排除其他成分的干擾。本法靈敏度高，簡便易行，可用于海蟑螂藥材的質控及藥理篩選的方法之一。
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