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  • 柱層析-紫外分光光度法測定射干、川射干、白射干中總黃酮的含量

    上一篇 / 下一篇  2008-08-30 20:21:52/ 個人分類:實驗技術

    作者:陳芳群

    射干Belamcanda chinensis(L.)DC,川射干(鶯尾)Iris tectorium Maxim、白射干Iris dichotoma Pal1.的干燥根莖,均為鳶尾科植物,前者茍中國藥典1985年版收載品種, 后兩者依次為四川,陜西地方習用主流品種,在藥用上有相似的作用,均含有多種異黃酮成份,主要化臺物基本相同, 以射干甙(tectoridin), 射干甙元(tectorlgenin).鳶尾甙元(irigeni)為主,這些成份具有消炎抗流感等活性,是射干的有效成份之一。

    本文采用將樣品提取液經聚酰胺柱層析屆,用紫外分光光度法,于2B6±2rim波長外測定吸收度,以射干甙計算總黃酮含量,方法簡單,較準確,易于推廣使用,為考查藥材內在質量,提供了一種可靠易行方法。

    一.儀器及藥品

    射干甙對照品(自提)熔點257~258℃,并經元素分析,紫外, 紅外,質譜等進行鑒定聚酰胺(83305部隊101廠產10~30目),使用前用70%乙醇預處理。

    層析柱:內徑2.7cm,長24cm。

    超聲振蕩器:無錫超聲電子廠產品。

    紫外舟光光度計SP 7-500 型或日本島津-260。

    二 實驗方法

    1.總黃酮的紫外吸收曲線精密稱取射干、川射干、白射干粉末各1g(3號篩),分別置50ml容量瓶中,加入甲醇45ml,放入超聲振蕩器中,攝蕩提取1小時、取出,放冷,加甲醇至劐度.搖勻,靜置,精密量取各澄清液適量,分別置50ml容量瓶中,加70%乙醇至刻度.搖勻.并用射干甙對照品的70%乙醇液(適當濃度)作對照,于紫外分光光度計上.在200~400nm波長范圍內測定其吸收曲線,隨行試劑作空白。

    2.提取時間的確定

    精密稱取射干(或川射干)粉末lg,分別置50m1容量瓶中,加甲醇45m1,放入超聲振蕩器中,分別振蕩提取15,30,60,9O,120分鐘,取出,放冷, 加甲醇至剎度, 搖勻, 靜置,分別精密吸取等量澄清液適量,置5Oml容量瓶中,用70%己醇稀釋至劉度,在266±2nm波長處測定吸收度,實驗結果表明,提取30分鐘已接近提取完全, 為了充分提盡,故采用l小時。

    3.標準曲線繪制

    精密稱取射干甙對照品lOmg(105℃乾燥至恒重),置10ml容量瓶中,加70%乙醇適量溶解,并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1ml置l0ml窖量瓶中,加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取0.1,0.3,0.5,0.7,0.9ml,分別置lOml容量瓶中,各加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,于266nm波長處,測定吸收度,隨行試劑作空白,繪制標準曲線,表明射干甙濃度在0.001~0.009mg/ml范國內符臺比耳定律, 回歸方程為x=0.4683y-0.2048,r=0.9998。

    4.回收率試驗:精密稱職射干粉末1g,加入精密稱定的2Omg射干甙對照品,按樣品測定法項下進行提取,層析、測定,得回收率平均值(n=5)。未經層析1.45%,層析后2.09%。

    5,樣品的涮窟及結果精密稱取樣品粉末(3號篩)lg,置50ml容量瓶中,加甲醇45ml,放入超聲振蕩器中振蕩提取1小時, 取出,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,靜置,精密量取上清液0.10~0.2ml(射干,白射干0.2ml,川射干0.1m1).于裝有0.3g聚酰胺的層析柱上,用70%乙醇進行洗脫, 流速每分鐘約20滴,收集洗脫液,定容成50m1,搖勻,在波長266±2nm處測定吸收度, 隨行聚酰胺70%乙醇洗脫液作空白對照, 由于標準曲線通過原點,采用外標一點比較法(即隨行與樣品提取液相近濃度的射干甙70%乙醇液,測定其吸收度)計算其含量(或用射干甙標準曲線或用回歸方程計算),此即層析后樣品總黃酮含量。同時男取相同量的上述樣品提取液,分別置50ml容量瓶中,用70%乙醇稀釋至刻度,隨行空白試劑作對照,于上述波長處,測定噯收度, 按上述方法計算其含量.此即未經層析樣品提取液總黃醑含量。

    三.小結

    本文介紹三種射干中,含總黃酮以川射干最高,正品射干與白射干相近,這和文獻記載川射干有小毒,瀉下是否有關,值得進一步探討。本品簡便易行,含量測定數據較準確可靠,易于推廣使用。

    參考文獻

    [1] 中國藥典,252頁1985

    [2] 四川省中藥材標準,l3頁,198

    [3] 江蘇醫學院編·中藥大辭典,上冊,746頁,1975


    TAG: 含量黃酮柱層析

     

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