血小板第四因子在原核中的高效表達、分離純化及活性測定

摘要:目的:構建重組表達質粒pET- 32cPPF4 ,并在原核中進行表達,以探討其對白血病細胞系(HEL) 細胞增殖的作用。方法:通過PCR 方法從含有PF4 基因的PQE - 60PPF4 質粒中擴增PF4 ,用Nco ⅠPHind Ⅲ雙酶切,克隆到原核表達質粒pET - 32C 中,使之在BL21 表達,Ni - Chelating Sepharose 親和柱純化,用細胞集落形成方法研究重組PF4 對HEL 的抑制作用。結果:菌株篩選后在大腸桿菌中獲得可溶性高效表達,重組PF4 占菌體總蛋白的22 %。腸激酶酶切除去N - 端融合部分,獲得了高純度的重組人血小板第四因子(rh - PF4) ,純度為95 %以上。活性實驗發現重組PF4 可抑制HEL 細胞集落的形成,抑制率為47 %。結論:原核表達質粒pET- 32C可高效可溶性表達PF4 ,重組PF4 對HEL 細胞的增殖有抑制作用。