人肺表面活性物質相關蛋白A1 基因在大腸桿菌中的表達及產物的分離純化

【摘要】　目的　研究人肺表面活性物質相關蛋白A1 (SP2A1) 在大腸桿菌中的表達、產物純化及免疫原性。方法　將人SP2A1 基因克隆至表達載體pGEX22T 上,分別轉化至大腸桿菌JM101、JM105、JM109、XL12blue 和BL21(DE3) 等不同宿主,并在不同溫度中的表達,采用包涵體純化方法及親和層析法純化目的蛋白,用ELISA 及Westert blot 初步分析SP2A1 蛋白的免疫原性,融合蛋白質經凝血酶酶切分析。結果　SP2A1 基因在前4 種宿主中表達有完整蛋白質和不完整蛋白質,目的蛋白質分別占總蛋白的617 %、918 %、913 %、1418 %;于28 ℃時,該基因在BL21(DE3) 宿主中表達產物均為完整蛋白質,占總蛋白質的10 %。經包涵體純化和Glutathione Sepharose 4B 親和層析純化,可獲得純度達95 %以上的純化蛋白。目的蛋白可被抗SP2A 多克隆抗體特異識別,凝血酶作用后可切出相對分子質量為26 000的目的蛋白質片段。結論　人組織特異性蛋白質SP2A1 可在大腸桿菌中表達,表達產物具有良好的免疫原性。