蛋白質水力學半徑的測定及用于蛋白質變性過程的實時監控

摘要: 采用納米粒度分析儀Zetasizer Nano 測定了牛血清白蛋白(BSA) 的水力學半徑, 考察了p H、離子強度、表面活性劑等的影響, 并用于BSA 熱變性和脲變性過程的實時跟蹤。隨p H 增大, BSA 水力學半徑呈“U”形變化趨勢; 酸性條件下, 分子膨脹, 隨著鹽濃度升高, BSA 分子先小幅減小后顯著增大; 中性p H 范圍, 離子強度對蛋白質分子尺寸影響很小, 蛋白質性質相對穩定。離子型表面活性劑在蛋白質表面吸附, 從而影響BSA水力學半徑。通過水力學半徑的測量實時跟蹤蛋白質變性過程的分子變化, 發現增加熱變性中離子強度可加快變性速率, SDS 加入增大了BSA 變性溫度Tm 。脲在促使BSA 分子擴張的同時, 對鏈伸展有抑制作用; 在DTT存在下, BSA 的水力學半徑隨著時間變化逐漸增大。結果表明, 簡便的水力學半徑測量可以用于蛋白質大小的表征, 并可實時跟蹤蛋白變性過程的分子尺度變化。