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    核酸、蛋白技術常用貯存液的配制

    關鍵詞: 核酸 蛋白技術來源: 互聯網

    1.30%丙烯酰胺溶液

    【配制方法】

    將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之,補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。

    【注意】

    丙烯酰胺具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具。可認為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。

    一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。

    在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。

    2.40%丙烯酰胺

    【配制方法】

    把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為1L。

    【注意】

    見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。

    3.放線菌素D溶液

    【配制方法】

    把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數為21,900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。

    【注意】

    放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

    藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導作用。

    4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

    【配制方法】

    在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃

    5.10mol/L乙酸酰溶液

    【配制方法】

    把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。

    6.10%過硫酸銨溶液

    【配制方法】

    把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數周。

    7.BCIP溶液

    【配制方法】

    把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃

    8.2×BES緩沖鹽溶液

    【配制方法】

    用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室溫下用HCl調節 該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成小份,保存于-20℃。

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