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    大腸桿菌基因型及遺傳符號說明系列二

    關鍵詞: 大腸桿菌 基因型來源: 互聯網

    1、抗藥性相關的基因型

    gyrA(Gyrase)

    功能:gyrA基因表達 DNA促旋酶 A亞基。DNA促旋酶在 DNA復制時具有使 DNA解旋和回旋的作用。萘啶酮酸 (Nalidixic acid)、4-喹啉( 4-Quinoline)等抗生素抑制 DNA促旋酶的活性是通過與促旋酶復合體 (A2B2)中的 A亞基的結合實現的。gyrA基因的變異使 DNA促旋酶 A亞基不能正常表達,萘啶酮酸和熒光喹啉等失去結合目標,從而使該基因型的菌株具有了對萘啶酮酸(Nalr)和熒光喹啉的抗性。

    rpsL(Ribosomal protein small subunit)

    功能:細胞中的核糖體是蛋白質生物合成的場所,大腸桿菌細胞中的核糖體包含兩個亞基,即 50S亞基(23SrRNA、5SrRNA、34種蛋白質)和 30S亞基 [16SrRNA、21種蛋白質(S1~S21)].rpsL基因就是表達核糖體 30S亞基中的 S12蛋白質,S12蛋白作用于翻譯的開始階段。鏈霉素( Streptomycin)等抗生素的作用位點就是核糖體 30S亞基上的 S12蛋白質,正常情況下鏈霉素與 S12蛋白結合使蛋白質的生物合成不能進行,細胞停止生長。 rpsL基因的變異使鏈霉素失去結合位點,從而使該基因型的菌株具有了對鏈霉素的抗性(Str r)。

    Tn5(Transposon)

    功能:在原核生物和真核生物基因組中都存在有可移動的 DNA序列,一般稱這段序列為轉座子或轉位基因,轉座子上通常帶有抗藥性基因。 Tn5是載有卡那霉素( Kanamycine)抗性基因的轉座子,當Tn5轉位到大腸桿菌基因組時,能使此菌株獲得卡那霉素的抗性(Kmr)。

    Tn10(Transposon)

    功能:Tn10是載有四環素( tetracycline)抗性基因的轉座子。當 Tn10轉位至大腸桿菌基因組時,能使此菌株獲得四環素的抗性 (Tet r)。

    2、能量代謝相關的基因型

    lacZ(Lactose)

    功能:lacZ基因是大腸桿菌中 lac操縱子的結構基因,表達β-半乳糖苷酶,分解乳糖為半乳糖苷。β-半乳糖苷酶是由四個相同的亞基組成的,每個亞基又包含兩個片斷,即α片斷和ω片斷,只有這兩種片斷同時存在時,β -半乳糖苷酶才表現出活性。lacZ基因的變異或缺失將直接導致β-半乳糖苷酶活性缺失,細胞在只有乳糖作為碳源的培養基中不能生長,由此可以進行菌株的篩選和純化。

    lacZ M15(Lactose)

    功能:lacZM15是表達β -半乳糖苷酶α片斷的一段基因,當 M15缺失(△ M15)時, lacZ基因雖然能表達ω片斷,但不能表達α片斷,β -半乳糖苷酶沒有活性。當帶有 lacZ(α片斷)基因的 lac操縱子通過載體 DNA(如 pUC19 DNA)轉化到 lacZ△M15基因型的細胞 (如 E.coli JM109)時,在有 IPTG (異丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情況下, β-半乳糖苷酶表現出活性,它能分解 X-gal (半乳糖類似物),使其呈現藍色。因此可以通過平板上的藍白菌落進行克隆體的鑒定。

    lacI q(Lactose)

    功能:lacI是大腸桿菌中 lac操縱子( Operon)的調節基因,它所表達的阻遏蛋白是 lac操縱基因(Operator)的抑制因子,這種阻遏蛋白能與過量的乳糖結合而失去對操縱基因的抑制,使 lac 操縱子上的結構基因 lacZ(β-半乳糖苷酶)、lacY(透性酶 )、lacA(乙酰基轉移梅)得以正常表達。IPTG(異丙基 -β-D-1-硫代半乳糖苷) 作為乳糖的類似物與 lacI阻遏蛋白結合而使操縱基因不被抑制,因此 IPTG經常作為 lac 操縱子的誘導劑而使用。基因型 lacIq是 lacI基因發生變異而使其大量( quantity)的表達阻遏蛋白,從而使 lac操縱基因幾乎完全被抑制。利用這種基因型的菌株進行基因表達時,可以使目的基因的表達得到更有效的人為控制。

    ara(Arabinose)

    功能:ara基因表達阿拉伯糖代謝所需的各種酶,包括: araA表達阿拉伯糖異構酶、 araB表達核酮糖激酶、araC表達阻遏蛋白(起調節作用), araD表達 L-核酮糖-4-磷酸差向異構酶、araE表達低親和型 L-阿拉伯糖轉運蛋白、araF表達 L-阿拉伯糖結合蛋白、araG表達高親和性的 L-阿拉伯糖轉運蛋白。ara基因的變異,使細胞不能利用阿拉伯糖進行能量代謝,可以利用此特性進行菌株篩選。

    mtl(Mannitol)

    功能:mtl基因包括 mtlA、mtlC、mtlD三種基因。 mtlA表達磷酸轉移酶、mtlC表達阻遏蛋白(起調節作用)、mtlD表達甘露醇 -1-磷酸脫氫酶。mtl基因的變異使甘露醇代謝不能進行,細胞在以甘露醇作為唯一碳源的培養基中不能生長。

    xyl(Xylose)

    功能:xyl基因包含 xylA、xylB、xylR三種基因。xylA表達 D-木糖異構酶、xylB表達木酮糖激酶、xylR作為調節基因表達阻遏蛋白。xyl基因的變異使細胞不能以木糖作為碳源進行能量代謝。

    gal(Galactose)

    功能:gal基因表達半乳糖代謝所需的各種酶類及調節蛋白,包括: galE(17 min)表達尿苷二磷酸(UDG)半乳糖-4-差向異構酶、galK(17 min)表達半乳糖激酶、galP(64 min)表達半乳糖透性酶、galR(62 min)表達半乳糖操縱子的阻遏蛋白、galT(17 min)表達半乳糖-1-磷酸尿苷酰轉移酶、galU(27 min)表達葡萄糖-1-磷酸尿苷酰轉移酶。大腸桿菌 K12株中通常出現的基因型是 galK和 galT,由于這兩種基因的變異使細胞不能直接利用半乳糖作為碳源。因此通過在昀小培養基中添加半乳糖與否,進行菌株篩選和基因型確認。

    srl(Sorbitol)

    功能:srl基因包含 srlA、srlC、srlD、srlR等基因。srlA表達磷酸轉移系統相關的酶(葡萄糖醇-山梨醇透性酶、磷酸轉移酶 II等)、srlD表達山梨醇-6-磷酸-2-脫氫酶、 srlC、R都是調控基因,表達葡萄糖醇操縱子的阻遏蛋白。 Srl基因的變異使細胞對山梨醇的吸收和利用受到阻害,在以山梨醇作為唯一碳源的培養基中,此基因型的菌株不能生長。

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