材料：

質粒DNA

指數生長的真核細胞

PEI （聚乙烯亞胺）

1×HBS （pH7.4）

配方：

PEI 儲存液（100 μM）：稱取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS （pH7.4）中， 0.2 μm 濾膜過濾，儲存于4℃備用。

1×HBS （pH7.4）： 將8.76 g NaCl 溶解于900 ml 超純水，加入20 ml 1 M 的HEPES，調pH 值到7.4，定容至1 L，過濾（0.2 μm 濾膜）后儲存于4℃備用。

方法：

1．細胞分盤： 通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以4×105 至8×105細胞/cm2 的密度平鋪細胞于60 mm 組織培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90％）。根據細胞貼壁情況于含5％ CO2 的37℃溫箱中孵育8-24 h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2 mL 預熱的無血清培養基。

2.制備PEI-DNA 混合物：以60 mm 組織培養皿用420 μL 反應總體積為例。準備兩支1.5 mL 離心管，一管將質粒DNA（總量2-8 μg 為佳）加入240 μL HBS中，混勻。另一管中則用HBS 將100 μM 的PEI 儲存液稀釋成10 μM，充分混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中，充分混勻后室溫靜置20-30 min。最后將這420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％ CO2 的37℃ 溫箱孵育。

注：每次用100 μM 的PEI 儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。

3. 培養6-10 h 后更換為37℃預熱的含有血清的培養基，繼續培養，16 h 左右可以觀測到報告基因的表達。