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  • 實驗方法> DNA實驗技術> DNA基礎知識>異源表達經驗談

    異源表達經驗談

    關鍵詞: 異源表達 經驗談來源: 互聯網

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    異源蛋白的表達是個很復雜的問題,有許許多多的影響因素,而且由于蛋白本身千差萬別,很難有一個很完善或很標準的流程方法。 另外,表達的宿主也是多種多樣,目前比較常用的包括E.coli,酵母(以甲醇酵母居多),昆蟲細胞,哺乳動物細胞等,各自有著其本身的特點,優缺點各異。

    1. 宿主的選擇。 表達宿主雖眾多,但比較常用的也就E.coli,酵母(以甲醇酵母居多),昆蟲細胞,哺乳動物細胞等,各自代表了一種體系。 E.coli 原核宿主,無翻譯后修飾。但周期短、費用低、表達量大,一直是最常用的宿主之一。蛋白一般很好表達,量很大,但很可能由于蛋白的翻譯后修飾不完善而沒有活性(或形成包涵體),尤其是表達真核蛋白時最應注意。 酵母,有了比較完備的翻譯后修飾系統,尤其是糖基化。但是個人感覺酵母表達異源蛋白時對蛋白本身的特點要求很大,有的蛋白表達量非常大,有的卻幾乎一點也沒有,很折磨人。 昆蟲細胞和動物細胞本人沒有做過,但園子里也有很詳細的介紹,搜一下google也有不少,其中還有許多是畫成了表格,對比各自的優缺點,網絡不好,沒找鏈接,希望有人可以不全,多謝多謝! 另外,也有很多用鏈霉菌表達的成功實例,不過個人感覺鏈霉做起來相當麻煩,周期長,轉化困難,表達量也沒什么優勢,而且翻譯后修飾雖然也有,但仍與真核差別較大。不過鏈霉菌有許多次級代謝產物(一些小分子物質)可能比蛋白表達本身更有意義,我們實驗室就有很多人在做這方面研究。

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