問：請問哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多謝！

答：1、胰酶是0.25%,這是質量體積比，就是說0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。

2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根據細胞消化的難易程度自己調整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養基培養，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。

3、EDTA的濃度也是質量體積比。和胰酶一起溶于PBS。

4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。

5、胰酶和EDTA在pH 為8左右的時候最易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。

6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾除菌。

7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節約時間和濾器，用的時候對上滅菌PBS即可。

8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會，因為加的量很少，所以一般不會凍壞細胞。

9、消化時，向培養瓶中加入適量胰酶，個人經驗，一般10cm培養皿加入0.5ml足已，加入后，立刻搖晃培養皿，使胰酶鋪滿，一旦鋪滿，立刻用負壓吸引器吸去多余的胰酶，再放入37度培養箱消化。

10、注意，過量的胰酶對細胞是有害的，而EDTA過多也會影響貼壁，所以沒必要把細胞泡在胰酶里面消化。

11、胰酶37消化效果最好，低于37度也有消化能力，有些容易消化的細胞在消化時甚至不需要放入培養箱。注意，不可消化過久。 、

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