【目的要求】 1. 實驗目的 ⑴ 通過學習生化及相關學科的理論和技術，熟悉并進一步掌握酶的提取、分離、純化、檢測及其生物學性質和理化性質的實驗技能。 ⑵ 初步培養從總體水平進行實驗的設計，進一步加強并提高綜合分析解決問題的能力。 ⑶ 培養科研工作中的協作精神和勤儉而高效的科研作風。 2. 實驗要求 ⑴ 本實驗由面包酵母為初始材料，制備高純度羧肽酶Y，對羧肽酶Y生化性質的檢測。 ⑵ 通過相關文獻資料的收集、分析、設計本實驗的可行報告。 ⑶ 可行性報告包括實驗目的、意義、國內外進展、實驗方法和技術路線及可行性分析、實驗預期結果。 ⑷ 在本實驗開始前一個月，將實驗報告草案提交指導教師，以審核和準備實驗材料等。 ⑸ 實驗報告草案應提供最少十篇文獻，其中至少有兩篇是近五年內的文獻，包括新技術、新方法在生物大分子研究中的應用。 (6) 文獻按學術期刊論文的格式要求，即作者、文章名、刊名、年、卷(期)、頁碼，參考書籍類同。 ⑺ 本實驗基本兩人一組，在部分實驗中需幾組合作進行。 ⑻ 實驗報告包括：采用實驗的原理；實驗所需試劑、儀器、設備；提取、分離、純化的每步驟的蛋白回收率、活性回收率，最終產率；按實驗內容，提供實驗結果及相關圖表；完成實驗后從整體上進行相關的討論。 【實驗內容】 1 ．羧肽酶Y活性檢測 ⑴ 酶活力測定方法 ⑵ 酶活力單位定義 ⑶ 比活力定義 ⑷ 蛋白含量測定方法 2. 面包酵母羧肽酶Y的提取 ⑴ 每組500克新鮮面包酵母 ⑵ 利用溶解度等原理進行羧肽酶Y提取 ⑶ 羧肽酶Y的活化 3. 羧肽酶Y的分離、純化 ⑴ 利用各種方法，從上述提取液分離羧肽酶Y ⑵ 每步純化前蛋白純度檢測 ⑶ 分離純化過程中跟蹤檢測活性組份蛋白質含量和酶活性 4. 羧肽酶Y理化性質? ⑴ 采用兩種方法驗證羧肽酶Y純度 ⑵ 羧肽酶Y的分子量測定 ⑶ 羧肽酶Y的等電點測定 5. 羧肽酶Y的酶學性質 ⑴ 在活力單位定義確定后，求出羧肽酶Y的Vmax和Km ⑵ 初步確定羧肽酶Y的最適pH ⑶ 初步確定羧肽酶Y的最適溫度??? ⑷ 提出最少兩種羧肽酶Y的可逆抑制劑并驗證抑制類型 ⑸ 提出羧肽酶Y的激活性并驗證?? (6) 羧肽酶Y的熱穩定性