本文根據華東理工大學生物工程學院的酶工程課件整理而成

一、實驗安排

第1次 菌體超聲破壁、離心、包涵體復性、 裝離子交換柱

第2次 測酶活、定蛋白離子交換層析 層析樣品進行濃縮、透析

第3次 濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白 裝分子篩柱

第4次 分子篩層析，并對收集樣品進行測活、定蛋白等

第5次 對分離純化各樣品進行蛋白電泳分析，并繪出分離純化表

二、實驗操作

第1次： 菌體超聲破壁、離心、包涵體復性、裝離子交換柱

實驗順序：超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復性

掌握要點：破壁原理

第2 次：測酶活、定蛋白、 離子交換層析分析 、 層析樣品進行濃縮、透析

實驗順序：測酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測蛋白峰→酶活曲線測定→收集樣品→ 濃縮 →透析 涉及單元實驗：測酶活、定蛋白、 離子交換層析、濃縮、透析

掌握要點：堿性磷酸單酯酶測活原理

紫外吸收法繪蛋白濃度曲線方法

離子交換層析原理及方法

濃縮及透析常用方法

第3次：濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白、裝分子篩柱

實驗順序：濃縮透析前、后樣品測活→考馬斯亮藍法定蛋白→裝分子篩柱→平衡

涉及單元實驗：測活、定蛋白、裝分子篩柱

掌握要點：考馬斯亮藍法測蛋白濃度方法

裝分子篩柱方法

第4次：分子篩層析，并對收集樣品進行分析

實驗順序：測活樣品進行分子篩層析→紫外吸收測蛋白峰--酶活曲線測定→考馬斯亮藍法定蛋白

涉及單元實驗：破壁、離心、分子篩層析、復性

掌握要點：分子篩層析原理

對分離純化各樣品計算比活

第5次：對分離純化各樣品進行蛋白電泳分析， 并繪出分離純化表

實驗順序：蛋白電泳，同時進行數據分析

涉及單元實驗：蛋白電泳

掌握要點：掌握蛋白電泳方法

了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法

繪制酶的分離純化表