【材料與試劑】

（1）2×SDS凝膠加樣緩沖液

（2）聚丙烯酰胺凝膠電泳槽和電泳儀

（3）加樣器和吸頭等

（4）水浴鍋

【操作方法】

（1） 把上述處理的樣品按1:1（V/V）與2×SDS凝膠加樣緩沖液混合，100℃加熱3分鐘，使蛋白質變性；

（2） 取出變性蛋白質，立即放于冰上。樣品如粘稠可進行超聲對DNA進行剪切，以最大功率處理0.5～2分鐘應能有效地將裂解液粘稠度降至可控水平（注意：此步驟一定要在冰上進行）；

（3） 如有沉淀以10 000g將樣本4℃離心10分鐘，將上清液移至另一管中，棄去沉淀物；

（4） 計算使用Western印跡法檢測靶蛋白所需要的樣本量，一般Western印跡法技術檢測中等大小蛋白的檢出下限約為1～5ng。在厚0.75mm的SDS聚丙烯酰胺凝膠上，每個泳道可加樣100μg而不致過多；

（5） 用玻璃微量進樣器按順序加樣，注意沿加樣孔底上樣，否則樣品容易漂走。加樣量不宜過多或過少，一般15～20ul為宜。沒上樣的加樣孔中加1?SDS凝膠加樣緩沖液；

（6） 用注射器排除兩玻璃板底部的氣泡，將電泳裝置接通電源（正極接下槽，負極接上槽），凝膠上所加電壓為8v/cm,當溴酚藍前沿進入分離膠后，電壓可提高到15V/cm,繼續電泳直至溴酚藍到達分離膠底部（約4小時），關閉電源；

（7） 從電泳裝置上卸下玻璃板，放入一瓷盤中，用一注射器吸取若干毫升電泳緩沖液，將針頭插入一玻璃板與凝膠之間，小心不要將凝膠刺破，沿玻璃板從左至右注入電泳緩沖液，將玻璃板與凝膠分開。靠近左邊切去一角以標明凝膠的位置；

（8） 如不需做免疫檢測可直接用考馬斯亮藍染色。