(1)執行標準：《GB/T 22388-2008原料乳及乳制品中三聚氰胺檢測方法》

(2)方法及譜圖

1 液相色譜檢測方法

樣品前處理：

稱取2g試樣于50ml具塞離心管中，加入15ml三氯乙酸溶液、5ml乙腈溶液和5%醋酸鉛溶液(質量比)2ml，超聲提取10min，再震蕩提取10min后，以5000r/min離心10min。上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容到25ml，移取5ml濾液，加入5ml水混合均勻后，全部上樣。

凈化處理：

活化：5ml甲醇、5ml水依次活化固相萃取小柱

上樣：將全部待凈化液以1ml/min的流速通過固相萃取小柱

淋洗：依次用3ml水和3ml甲醇淋洗固相萃取小柱，淋洗完畢后，抽至近干

洗脫：用6ml5%氨化甲醇(v/v)(5%氨化甲醇：5mL氨水+95mL甲醇)溶液以1ml/min，

洗脫液于50℃下氮氣吹干，殘渣用1ml流動相定容，渦旋混合1min，0.45μm過濾。

色譜條件：

色譜柱：VenusilTM XBP C8(L) 4.6×250mm，5μm

流動相：緩沖鹽溶液-乙腈=85:15

緩沖鹽配制：準確稱檸檬酸2.10g和辛烷磺酸鈉2.16g，加入約980ml水溶解，調節pH到3.0后，定容至1L

紫外檢測器波長：240nm; 流速：1ml/min;進樣量：20μL

三聚氰胺標準品

牛奶中的三聚氰胺

2 液相色譜-質譜/質譜法(LC-MS/MS)

樣品前處理：

稱取1g試樣于50ml具塞離心管中，加入8ml三氯乙酸溶液、2ml乙腈溶液和5%醋酸鉛溶液(質量比)2ml，超聲提取10min，再震蕩提取10min后，以5000r/min離心10min。上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，做待凈化液。

凈化處理：

活化：5ml甲醇、5ml水依次活化固相萃取小柱

上樣：將全部待凈化液以1ml/min的流速通過固相萃取小柱

淋洗：依次用3ml水和3ml甲醇淋洗固相萃取小柱，淋洗完畢后，抽至近干

洗脫：用6ml5%氨化甲醇(v/v)(5%氨化甲醇：5mL氨水+95mL甲醇)溶液以1ml/min，洗脫液于50℃下氮氣吹干，殘渣用1ml流動相定容，渦旋混合1min，0.45μm過濾。

色譜條件：

正離子模式，離子噴霧電壓：4KV

霧化器：氮氣，40psi;干燥氣：氮氣，流速10L/min，溫度35℃;裂解電壓：100V

三聚氰胺牛奶樣品色譜圖

用VenusilTM HILIC 還可以將三聚氰胺及其手性異構體和其類似物:三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸分開，實驗條件及譜圖如下：

液相條件	質譜條件
色譜柱： VenusilTM HILIC  4.6×250mm， 5μm 流動相：10mM甲酸銨緩沖鹽溶液（pH 3.5）-乙腈=12:88 流速：1ml/min 進樣量： 20μL	正離子模式：0-6.5 ；9-20 正離子模式下毛細管電壓：3.5KV 負離子模式：6.5-9 負離子模式下毛細管電壓：3.0KV 源溫度：105℃;  洗脫溫度：300℃ 萃取電壓：4V;  RF透鏡電壓：0.5V 錐孔電壓：50 l/min

色譜峰: 1，三聚氰酸; 2，13C3-三聚氰酸;3，三聚氰胺;4，15N3-三聚氰胺;5，三聚氰酸一酞胺; 6，三聚氰酸二酞胺。

3 氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS和GC-MS/MS)

樣品前處理：

稱取5g試樣于50ml具塞比色管中，加入25ml三氯乙酸溶液，渦旋震蕩30s，再加入15ml三氯乙酸溶液，超聲提取15min,，加入2ml乙酸鉛溶液，用三氯乙酸溶液定容到刻度。充分混合后轉移上層溶液約30ml到50ml離心管中，以5000r/min離心10min。上清液待凈化。

凈化處理：

活化：5ml甲醇、5ml水依次活化固相萃取小柱

上樣：取5ml待凈化液以1ml/min的流速通過固相萃取小柱

淋洗：依次用3ml水和3ml甲醇淋洗固相萃取小柱，淋洗完畢后，抽至近干

洗脫：用6ml 5%氨化甲醇(v/v)(5%氨化甲醇：5mL氨水+95mL甲醇)溶液以1ml/min，洗脫液于50℃下氮氣吹干，殘渣用1ml流動相定容，渦旋混合1min，0.45μm過濾。

色譜條件：

5%苯基二甲基聚硅氧烷石英毛細管色譜柱，30×0.25mm，0.25μm

流速：1.0ml/min

升溫程序：70℃保持1min，以10℃/min的速率升溫至200℃，保持10min

傳輸線溫度：280℃;進樣口溫度：250℃;進樣方式：不分流進樣

進樣量：1μL;電離方式：電子轟擊電離(EI)

電離能量：70eV; 離子源溫度：230℃

掃描模式：選擇離子掃描，定性離子m/z99、171、327、342，定量離子m/z327

三聚氰胺牛奶樣品色譜圖

(3)注意事項

1、處理不同的樣品，離心的效果是不同的，有時離心后上清液仍然渾濁，若直接上樣會導致固相萃取柱堵塞，這時可以適當的提高離心的轉速或離心的時間，如果還不能解決該問題，可以用濾紙先過濾一下上清液再用固相萃取柱處理樣品。

2、樣品處理過程中注意交叉污染，影響檢測結果。

3、在做三聚氰胺的重復性實驗中，注意取樣和最終的定量、定容的準確性。

(4)訂貨指南

產品名稱	訂貨號	報價（元）
Venusil TM XBP C8（L）（LC法) Venusil TM XBP C18（L）(LC法) VenusilTM AS-T C18 (LC-MS法)	VX52505-L VX952505-L VAS951502-T	3200.00 3200.00 4200.00
DA-50+	5025-3002	4700.00
CleanertTMPCX 60mg/3mL,50	CX0603	1150.00