用Agilent 1120一體式液相色譜儀同時測定撲熱息痛_雙氯芬酸和布洛芬的方法建立和驗證

前言

　　在藥物及其雜質QA/QC的常規分析中，使用高準確度、高精密度和耐用的液相色譜系統很重要。Agilent 1120 一體式液相色譜儀基于已被證明了的可靠設計，可獲得所需的高質量數據。非常適用于藥物的常規QA/QC分析。在本研究中，我們測定了幾種藥物的精密度、線性和檢測限(LOD)。

實驗

儀器
　　? Agilent 1120一體式液相色譜儀包括配備了脫氣機的梯度泵、帶樣品盤的自動進樣器、柱溫箱和可變波長檢測器，見圖1。

　　? Agilent HC-C18(2)，高碳載量，150 x 4.6 mm，5 μm粒徑柱

　　? Agilent EZChrom Elite Compact軟件

色譜條件
　　? 流動相：
　　A: 水+ 0.05 % TFA
　　B: 乙腈+ 0.045 % TFA

　　? 梯度：
　　0分鐘, 25 %B;
　　1 分鐘, 25 %B;
　　4 分鐘, 60 %B;
　　7 分鐘, 70 %B

　　? 流速：1.5 mL/min

　　? 進樣量： 3 μL

　　? 柱溫：40 °C

　　? 檢測波長：230 nm
　　峰寬> 0.05 分鐘

　　? 分析時間： 8 分鐘

　　? 后時間： 2分鐘

結果與討論

　　選擇撲熱息痛、布洛芬和雙氯芬酸作為評價精密度、線性和檢出限的化合物。安息香酸作內標（ISTD）。表1 列出了所用的濃度。建立色譜方法，使所有化合物都得到基線分離。由于撲熱息痛在C-18固定相上幾乎沒有保留，需要特別處理。因此，選擇起始條件要讓撲熱息痛在選定的色譜柱上至少有一些保留。

　　另外，方法開發的目的還要使總分析時間盡可能短。分析和平衡時間限制在10 分鐘以內（圖2）。流動相含三氟醋酸作為改性劑，它對保留時間和峰形都有改進作用。4 分鐘的第一個梯度時間足夠快，保證第一個峰和第二個峰之間的時間盡可能短。

精密度
　　用UV檢測分析藥物，保留時間的精密度非常重要。另外，納克濃度的面積精密度也必須小于1 %，才能符合規范的要求。用濃度2 測定保留時間和峰面積的精密度。結果見圖3和表2。圖3是十次分析圖譜的重疊。

檢測限
　　根據濃度7 得到的色譜圖計算檢測限，見表3。布洛芬和雙氯芬酸的檢測限在幾百pg 范圍，撲熱息痛和安息香酸在幾十pg范圍。

線性
　　用濃度水平從1到7進行線性試驗。圖4 顯示了撲熱息痛的線性，以此作為實例。結果表明，在整個濃度范圍內線性良好。表4 列出了所有化合物的相關系數。

結論

　　用Agilent 1120一體式液相色譜儀分析了藥物化合物。用該儀器分析這些化合物可以達到很高的保留時間和峰面積精密度。保留時間精密度小于0.07 % RSD，基線分離峰的精密度小于1.0%RSD。檢出限在13到298 pg之間。結果顯示在分析濃度范圍內具有良好的線性，相關系數在0.999910到0.999975之間。