HPLC法測定食品中非食用色素酸性橙II

上一篇 / 下一篇 2009-03-01 20:36:39/ 個人分類：分析方法

作者：劉寧，肖白曼，張劍峰?

【摘要】 ?目的: 為保證食品安全，建立了一套檢測食品中非食用色素酸性橙II的方法。方法: 以甲醇-0.02mo1/L醋酸銨水溶液為流動相，梯度洗脫，在484nm用紫外檢測器進行檢測。結果: 其重復測定結果的相對偏差為5.91%，回收率在91.75%～104.20%范圍內。結論 :本方法適用于食品中合成色素與非食用色素酸性橙II的同時測定。

【關鍵詞】 ?非食用色素;酸性橙II;測定方法;HPLC

HPLC method for the determination of Inedible pigment acid orange II in foods

　　【Abstract】 ?0bjective:A rapid method using a reverse-phase high performance liquid chromatography for the determination of Acid Orange II in foods was presented。 Methods: It was flow is methanol-acetic acid ammonium，it was used as the mobile phase at a velocity of gradient。The eluate was detected by a UV detector at484nm。 Results: The variation coefficient was5.91%and the recovery of Acid Orange II was91.75%～104.20%。 Conclusions: This method was suitable for the determination of pigment and Inedible pigment Acid Orange II in foods。

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　　【Key words】 ?Inedible pigment;Acid orange II;Quantitative analysis;High performance liquid chromatography

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　　非食用色素酸性橙II又名金橙II、二號橙、桔黃橙、酸性金黃II或酸性艷橙GR，俗名金黃粉，化學名為2-萘酚偶氮對苯磺酸鈉，是一種酸堿指示劑。醫學上用于組織切片染色，在紡織上用作著色劑。酸性橙II屬非食用色素，食品中不允許加入。但是由于酸性橙II色澤鮮艷、著色穩定、價廉等特點，一些不法商販為了牟取暴利將其用于食品生產與加工，嚴重危害了消費者身體健康。因此，及時準確判斷食品中是否存在該非食用色素，建立一套快速、準確的食品中非食用色素酸性橙II的測定方法具有重要意義。

?? ?據國內文獻報道，酸性橙II的測定方法有紙層析法和分光光度法等［1，2］，這些方法操作時間長，定量精度差。我們經過大量實驗摸索，建立了高效液相色譜（HPLC）法測定食品中酸性橙II的方法，本方法快速、準確，適用于食品中合成食用色素與非食用色素酸性橙II的同時測定。?

　　1 材料與方法

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　　1.1 原理食品中非食用色素酸性橙II經提取制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離，根據保留時間定性，采用外標法進行定量。

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　　1.2 儀器高效液相色譜儀:Waters515泵，Waters紫外可見波長檢測器，KQ-100DB型數控超聲波清洗器，離心機。

　　1.3 試劑重蒸餾水、乙酸、甲醇（色譜純）、聚酰胺粉（過200目篩）、乙酸銨溶液（0.02mol/L）、檸檬酸溶液、無水乙醇-氨水-水溶液。酸性橙II:美國Aldrich公司;檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃:國家標準物質中心。

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　　酸性橙II標準溶液:準確稱取干燥的酸性橙標樣0.1000g，蒸餾水溶解，定容至100ml，此溶液1ml含1.00mg酸性橙II。臨用時，用蒸餾水稀釋至1ml含10mg的酸性橙II標準使用液。

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　　混合著色劑標準溶液:準確稱取按其純度折算為100%質量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、酸性橙II各0.100g，置100ml容量瓶中，加pH6水到刻度，配成水溶液（1.00mg/ml），臨用時，用水稀釋經0.45μm濾膜過濾，配成每毫升含各種標準物質10μg的混合著色劑標準使用液。

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　　1.4 分析步驟高效液相色譜參考條件:色譜柱:Diamonsil ?TM （鉆石）C 18 5μm，200mm×4.6mm色譜柱（迪馬公司產品）;流動相:甲醇（A）:0.02mol/L醋酸銨（B）;流速:1.0ml/min，梯度洗脫如表1所示;進樣量:20μl;柱溫:室溫;紫外可變波長檢測器:λ=484nm。

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　　表1 梯度洗脫時間（略）

　　1.5 試樣制備及測定

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　　1.5.1 液體樣品飲料實驗前，對于含二氧化碳試樣應預先加熱驅除二氧化碳;配制酒類加熱驅逐乙醇，可不經稀釋，過0.45μm濾膜后測定。

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　　1.5.2 固體樣品糕點類、鹵制品類、灌制品類、辣椒面等樣品，稱樣5.00～10.00g，粉碎混勻，加無水乙醇-氨水-水（70+1+29）溶液20ml，振搖0.5h，過濾，洗濾渣2次，合并濾液，用水（pH=6）定容，過0.45μm濾膜測定。

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　　1.5.3 奶制品可稱量5.00g試樣，按GB5009.23-2003聚酰胺吸附法提取色素［3］，經0.45μm濾膜過濾測定。

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　　2 結果與討論

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　　2.1 色譜條件對測定的影響實驗表明，酸性橙II在波長484nm測定，樣品中常見的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、咖啡因、維生素C、乙酸、檸檬酸等（1mg/ml）在可見波長下無響應，不干擾測定。

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　　2.2 流動相的選擇采用甲醇+醋酸銨體系作流動相，試劑價格便宜、易得，采用梯度洗脫可以同時測定檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃。

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　　2.3 線性范圍對酸性橙II在0.00～200μg/ml的范圍內配制標準溶液系列9個點，每標樣進3針，以標樣的峰面積的平均值為縱坐標，以標樣的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，并利用最小二階乘法進行線性回歸，得到在0.00～100μg/ml范圍內的線性方程為:A=85339.63C+105139.37，相關系數r=0.9997，酸性橙II的檢出限為0.05μg。檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅及日落黃在0.00～50μg/ml范圍內的線性方程分別為:A=74329.36C+5351.26，相關系數r=0.9987;A=85428.98C+125212.42，相關系數r=0.9982;A=85268.23C+112145.94，相關系數r=0.990;A=929123.47C+152372.68，相關系數r=0.9972。

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　　2.4 精密度將酸性橙II試樣（鹵雞爪）溶液應用本方法分別連續進樣8次（n=8），結果見表2。

　　由表2可以看出此方法精密度高，其變異系數為5.91%。

　　表2－表4 　（略）　

　　2.6 檢出限進樣量10.0μl，酸性橙II的最小檢出量為0.10μg，結果相對允許偏差<10%。?

　　3 實際樣品的測定

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　　采用上述方法，對市售鹵制品、飲料、灌腸類等48份試樣進行測定，檢出酸性橙II試樣1份（鹵制雞爪），含量為0.0045g/kg。

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　　4 小結

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　　酸性橙II屬化工染料，在食品中禁止使用，不法商販對酸性橙II的濫用，無疑對食品衛生監督、執法提出了新的課題。本方法分離效果好，靈敏度高，能滿足食品衛生學評價的要求，具有較強的使用價值。