高效液相色譜法測定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黃

［摘要］ 本文探討高效液相色譜法測定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黃含量的方法，豆制品中酸性金黃Ⅱ經粉碎，提取，過濾，得到的樣品提取液用高效液相色譜測定，流動相是甲醇乙酸銨0.02 mol/L=75+25，在檢測波長450 nm時，流速1.0 ml/min測定，色譜柱為SymmetryC18(250 mm×4.6 mmid，5 μm)。

［關鍵詞］ 豆制品；酸性金黃Ⅱ；高效液相色譜

High Performance Liquid Chromatography Determinate of Acid Orange Ⅱ??and Orarge Bin Bean Sample

　　Abstract:A sensitive and accurate High Performance Liquid Chromatography determinate of Acid OrangeⅡand orange B in bean sample.Acid OrangeⅡand orange B were extract from bean sample with the HPLC method was used to analyze estradiel.The optimized detection parameters were as follows:the colum was Symmetry C18 (250 mm×4.6 mmid,5 μm),the mobile phase was methanolaninoacetate (0.02 mmol/ml)=75:25,The phase flow rate was 1.0 ml/min.The UV detector was set at 450 nm.

　　Key words:Bean product; Acidity gold; High performance liquid Chromatography

　　豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黃是在醫學中應用于組織染色，木制家具、毛線、布料等的著色劑，但不法商販利用其顏色鮮艷、著色穩定、價廉的特點非法添加于豆制品中，嚴重危害了廣大消費者的身體健康［1］，國家尚無相應的檢驗標準方法，本文初步建立了用高效液相色譜法測定酸性橙Ⅱ和酸性金黃的方法，該方法能快速、準確、簡便的檢出酸性橙Ⅱ和酸性金黃，能滿足食品檢驗的需要。

　　1　試驗部分

　　1.1　儀器和試劑

　　1.1.1　儀器　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　高效液相色譜儀包括Waters1525型泵，2487型紫外檢測器，Breeze色譜工作站及手動進樣器。

　　1.1.2　標準品　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　酸性橙Ⅱ(純度86%)和酸性金黃(工業用純度90%)。

　　1.1.3　甲醇　

　　色譜純。

　　1.1.4　純水　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　由AKUPⅡI20型純水機提供的高純水。

　　1.1.5　0.02 mol/L乙酸銨溶液，pH=4.7。

　　1.1.6　堿性提取液　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　無水乙醇∶氨水∶水=70∶20∶10。

　1.2　色譜條件　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　色譜柱為SymmetryC18(250 mm×4.6 mmid，5 μm)流動相甲醇：0.02 mol/L乙酸銨溶液=75+25，溶液流速1.0 ml/min，柱溫為常溫，檢測波長450 nm，進樣量20 μl。

　　1.3　標準品的制備　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　吸取混合標準儲備液1.00 mg/ml適量，配成系列濃度為0，0.01 μg/ml，0.05 μg/ml，0.10 μg/ml，0.50 μg/ml，1.00 μg/ml的標準系列。

　　1.4　樣品前處理　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　稱取混勻粉碎的樣品5.00 g~10.00 g于100 ml燒杯，加pH=6的水50 ml，混勻，過濾，濾液加入1.00 g聚酰胺粉用，G3漏斗抽濾，pH=6的水沖洗2次~3次，堿性提取液解吸2次~3次，每次5 ml，收集解吸液，水浴揮干，將殘渣用蒸餾水溶解，定容至5 ml，然后過0.45 μm濾膜。標準和樣品濾液注入HPLC系統，按上述色譜條件測定。以保留時間定性，峰面積定量。

　　2　結果

　　2.1　波長選定　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　用流動相稀釋標準溶液，進行紫外掃描，由掃描圖譜可知，酸性Ⅱ和酸性金黃在450 nm有較大吸收，所以我們選取450 nm為檢測波長。

　　2.2　工作曲線與檢測限　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　以工作液含量X對色譜峰面積Y進行線形回歸，其結果表明，酸性橙Ⅱ和酸性金黃在0.11 μg/ml~1.00 μg/ml范圍內線性關系(Linear range)良好。回歸方程(Regression equation)，線性范圍，相關系數(Correlation coefficient)及檢測限(Detection limit)(S/N=3)見表1。表1標準曲線及檢出限項目（略）

　　2.3　標準圖譜及樣品圖譜如下(見圖1和圖2)。

　　2.4　方法精密度(n=6)　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　配制含酸性橙Ⅱ(純度86%)和酸性金黃0.05 μg/ml的樣品，注入HPLC系統按上述色譜條件六次測定(見表2)，結果表明，該方法有較好的精密度(RSD分別為2.06%，1.18%)。表2精密度測定次數（略）

　　3　討論

　　本文對高效液相色譜法測定酸性橙Ⅱ和酸性金黃進行了初步探討，認識還比較膚淺，此方法還有待進一步完善。

　　參考文獻：

　　［1］陳文，王正猛，吳曉蓉，等.單掃描極譜法連續測定食品中非食用色素酸性金黃和酸性大紅［J］.食品科學，2005，26(6)：210212.

　　［2］GB/T5009.352003.食品中合成著色劑的測定.