玫瑰紅Ｂ是什么及檢測方法

玫瑰紅Ｂ

Rhodamine B

玫瑰紅Ｂ：也稱羅丹明B，俗稱花粉紅,是一種堿性熒光染料。羅丹明B，經老鼠試驗發現，會引致皮下組織生肉瘤，被懷疑是致癌物質。

羅丹明B是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料；

Rhodamine B

英文名：Rhodamine B；

分子式：C28H31ClN2O3；

分子量：479.0175；

羅丹明B亮綠色閃光結晶粉狀物，溶于70份冰水中，10份乙醇中，150份氯仿中，呈帶強熒光的藍光紅色溶液，易溶于溶纖素，微溶于丙酮；遇濃硫酸呈黃光棕色，有強的綠色熒光，稀釋后呈大紅色轉為藍光紅色和橙色。其水溶液加氫氧化鈉后加熱，形成玫瑰紅絨毛狀沉淀。

主要用于造紙工業染蠟光紙、打字紙、有光紙等；與磷鎢鉬酸作用生成色淀，用于制造油漆、圖畫等顏料、也可用于腈綸、麻、蠶絲等織物以及麥稈、皮革制品的染色。任何染料都有脂團，所以至少可以透過皮膚，所以在高濃度時畢竟會有所謂的毒性，還是要注意，至于低濃度，至少也可以透皮膚的。

羅丹明B具有脂溶性，被用作調味品（主要是辣椒粉和辣椒油）染色劑。使用了被污染的調味品制作食品時會造成殘留。調味品使用羅丹明B染色時含量較高，甚至直接摻入，可進行現場檢測。食品中因其含量較低，需送實驗室檢測。現場檢測中使用非極性有機溶劑（例正己烷、正己烷+丙酮等）將其溶解并提取出，提取液流過中性氧化鋁固相萃取小柱吸附羅丹明B，用非極性有機溶劑（例正己烷）淋洗小柱，洗脫樣品油脂和食品內源性干擾物，用肉眼可觀測到在小柱上出現鮮亮的粉紅色條帶，判定為可疑樣品，該樣品需送實驗室作進一步確證檢驗。實驗室檢測法仍然采用非極性有機溶劑（例正己烷、正己烷+丙酮等）將羅丹明B 從食品中溶解并提取出，提取液流過中性氧化鋁固相萃取小柱吸附羅丹明B，用非極性有機溶劑（例正己烷）洗脫樣品油脂和食品內源性干擾物，再用極性有機溶劑（例甲醇）將羅丹明B從小柱上洗脫并收集，用反相高效液相色譜儀-紫外/可見光檢測器進行定性定量檢測。

Rhodamine B

層析用中性氧化鋁（100目），用前于105℃烘2小時，取下置干燥器中冷至室溫，裝入玻璃瓶中密閉放置。?

正己烷（分析純）；?

丙酮（分析純）；?

甲醇（色譜純）；?

20%丙酮的正己烷液：取100ml丙酮加400ml正己烷混合，作為羅丹明B的提取液和凈化液。?

氧化鋁固相萃取小柱：取5 ml塑料注射器管，下端口塞入小塊脫脂棉，裝入處理好的氧化鋁約3cm高，放置備用。?

羅丹明B標準溶液：稱取羅丹明B （分析純試劑 沈陽試劑三廠）5.0mg，用20%丙酮的正己烷液溶解并定容至50ml，配成含量為100ug/ml的標準儲備液。取此液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml，用20%丙酮的正己烷液稀釋并定容至50ml，配成濃度為 0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ug/ml標準系列溶液。

辣椒粉 取辣椒粉一小勺（約5g）放入小燒杯中，加入約40ml含20%丙酮的正己烷，搖動或攪拌2分鐘，靜置。取5 ml塑料注射器套管，下端口塞入小塊脫脂棉，將事先處理好的氧化鋁倒入注射器管中約3cm高，做成氧化鋁固相萃取小柱，待樣品杯上方澄清后，慢慢倒入小柱中，下端接一廢液杯，視顏色深淺倒入2-5ml，注意不要倒入太多，保證小柱的中下部仍為白色， 此時，含羅丹明B的樣品在柱上部會出現鮮亮的粉紅色的熒光條帶，條帶邊緣清晰，粉紅色隨含量的增加而加深和加寬，不含羅丹明B的樣品提取液不會出現粉紅色條帶，只會出現黃紅色的界面不清晰的寬帶，然后用含20%丙酮的正己烷20ml慢慢倒入小柱，粉紅色的條帶不下移，但更清晰，其余的黃紅色帶下移，可大部分被洗脫出，即可判斷為含羅丹明B的可疑樣品。?

辣椒油 取辣椒油一小勺（約2g）放入小燒杯中，加入約10ml正己烷（3.2），混勻。按上述“取5 ml塑料注射器套管，……即可判斷為含羅丹明B的可疑樣品。”操作。?

判定 初步判斷為含羅丹明B的可疑樣品需送實驗室中進行液相色譜確證檢驗。

Rhodamine B

高效液相色譜儀（雙泵、紫外/可見光檢測器）?

色譜柱 C18 4.6mm X 15cm（5μm）?

提取和純化?

辣椒粉：取辣椒粉1g，加入20ml含20%丙酮的正己烷，震搖10分鐘，靜置或過濾使分離出上層清液，殘渣加入10ml含20%丙酮的正己烷重復提取一次，合并2次提取液，混勻，用滴管將上清液加入氧化鋁小柱中[小柱預先用5ml提取液潤濕]，視顏色深淺決定上柱量，保證上完樣的小柱中下部仍為白色，含羅丹明B的樣品提取液在柱上部會出現鮮亮的粉紅色的熒光條帶，且粉紅條帶隨含量的增加而加深和加寬，不含羅丹明B的樣品提取液不會出現粉紅色條帶，只會出現黃紅色的不清晰的寬帶，用含20%丙酮的正己烷洗小柱，粉紅色的條帶不下移，但更清晰，其余的黃紅色帶下移可大部分被洗脫出，可判斷為含羅丹明B的可疑樣品，待洗柱的流出液無色時，滴入5-10ml甲醇，將羅丹明B色帶洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色譜儀進行確認。?

辣椒油：稱取辣椒油1g，加入10ml含20%丙酮的正己烷，混合均勻后滴入氧化鋁小柱中，按照上述“用滴管將上清液加入氧化鋁小柱……注入高效液相色譜儀進行確認”進行操作。?

其它食品：對于使用了紅辣椒油（粉）調味的食品（如紅油豆制品、紅油魚干等）稱取10-20g，用20%丙酮的正己烷洗下紅油（粉），或將樣品與洗脫液攪成勻漿將羅丹明B溶解提取出，將樣品液靜置或離心，分出有機相，根據水分的多少加入適量無水硫酸鈉脫水，按照上述“用滴管將上清液加入氧化鋁小柱……注入高效液相色譜儀進行確認”進行操作。含量少的樣品因粉紅色條帶太窄和顏色較淡肉眼看不清楚，仍可采用上述辦法，進一步用20%丙酮的正己烷洗滌小柱至流出液無色時，滴入5-10ml甲醇，將羅丹明B色帶洗下并收集，經濃縮后，注入高效液相色譜儀進行確證檢驗。?

色譜柱：C18 4.6mm X 15cm（5μm） 進樣 5ul?

流動相：75%甲醇水溶液 1ml/min?

檢測器: 紫外/可見光（UV/VIS）檢測器；波長：550nm?

定性定量：羅丹明B標準溶液保留時間定性，外標法定量。?

結果計算?

Y = C×V/M?

Y——樣品中羅丹明B的含量（mg/kg）?

C——從標準曲線上查得的羅丹明B的濃度（ug/ml）?

V——測試樣品總定容體積（ml）?

M——樣品的稱樣量（g）

①使用C18柱的性能有差異，流動相濃度應略作調整。

②在本法所給分離條件下，樣品基質在羅丹明B附近無干擾峰，其他許多紅色偶氮染料均可在羅丹明B之后出峰，注意調整這些干擾峰與羅丹明B分離度，干擾的成分為：蘇丹橙G、對位紅、蘇丹紅7B、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ。