雙向電泳和質譜技術分析HCV NS3轉化肝細胞的蛋白質組

[摘要] 　目的: 持續感染丙型肝炎病毒( HCV ) 在肝細胞癌( HCC ) 發生中起重要作用, 細胞轉染和成瘤實驗表明HCV NS3 對人肝細胞具有轉化作用和致瘤活性。本實驗旨在探討HCV 非結構蛋白3(NS3 ) 轉化肝細胞的蛋白質組。方法: 構建穩定表達HCV NS3 N 端多肽的人肝細胞( pRcHCNS3 /QSG)及空白質粒轉染細胞( pRcCMV /QSG) ,雙向電泳技術分離兩種細胞的總蛋白,差異蛋白質點進行質譜分析,Western印跡驗證蛋白表達差異。結果: 得到分辨率較高、重復性較好的雙向電泳圖譜。pRcHCNS3 /QSG和pRcCMV /QSG細胞的蛋白質斑點數分別為( 1 18 3 ±77 ) 和( 1 0 95 ±82 ) 個, 兩組平均匹配數為( 92 0 ±6 0 ) 個。初步鑒定出15 個有意義的蛋白質點。其中Ras, P38 , HD53 等參與調節信號轉導的蛋白在pRcHCNS3 /QSG細胞中表達上調,Western印跡結果亦證實pRcHCNS3 /QSG細胞中磷酸化的P4 4 / 4 2和P3 8 表達增加。鑒定出的差異蛋白質還包括一些調節細胞周期、免疫反應、與腫瘤侵襲和轉移相關的蛋白質及參與肝臟代謝的蛋白質。結論: HCV NS3 可能通過影響多種蛋白表達, 經相應信號轉導途徑,如絲裂原活化蛋白激酶途徑,使細胞發生惡性轉化。進一步弄清信號轉導過程和相互關系不僅對了解HCV 相關性HCC的發生機制有重要意義,而且為從分子水平治療HCC提供新思路。