適于人表皮組織蛋白質組分析的雙向電泳技術

摘要：【目的】建立適于人表皮組織的雙向電泳技術，并應用質譜技術對人表皮組織蛋白質組進行初步分析。【方法】利用組織勻漿法制備人表皮組織總蛋白、固相pH 梯度膠條進行雙向電泳、PDQuest 7.4 軟件比較和分析電泳圖譜，利用質譜技術鑒定部分蛋白斑點。【結果】成功建立了適用于人表皮組織蛋白質組分析的雙向電泳技術，獲得和比較了人表皮組織雙向電泳四種染色圖譜。人表皮組織的蛋白質在pH5～8 范圍內分布均勻，分子量集中在15～100 ku 之間。銀染圖譜獲得的蛋白斑點數為586±14；對質譜兼容的幾種染色方法進行比較分析，結果表明Neuhoff 膠體考染更適合于人表皮組織蛋白質的雙向電泳分析，其在上樣量為350 μg時蛋白斑點數達394±9，匹配率為85.53%。利用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術成功獲得了Neuhoff 膠體考染的兩個蛋白斑點的肽質量指紋圖譜，并鑒定為Caspase 14 前體和27 ku 熱激蛋白1。【結論】建立的表皮組織雙向電泳技術及其圖譜可為皮膚蛋白質組學研究提供參考，為人皮膚蛋白質組學平臺的構建奠定良好基礎。