杉木葉片蛋白質組的雙向電泳技術優化

摘要: 為建立適用于杉木(Cunninghaimia lanceolata)葉片蛋白質組研究的雙向電泳技術，對杉木葉片蛋白質的溶解方法、上樣量、IEF 及SDS-PAGE 電泳等關鍵步驟進行了優化。結果表明，杉木葉片蛋白質主要分布在pH 4- 7 范圍；裂解液中含有硫脲（2 mmol/L）才能較充分地溶解蛋白，DTT 濃度為60 mmol/L、上樣量1.5 mg 時得到的圖譜分辨率較好且蛋白斑點分布均勻、清晰，拖尾現象明顯減少，平衡液Ⅱ中碘代乙酰胺濃度為450 mg (15 ml)-1 時能提高圖譜分辨率；采用與質譜兼容的考馬斯亮蘭進行染色，得到近700 個蛋白點。