蛋白質在固定Zn2 + 金屬螯合親和色譜中的變性熱力學

摘　要　在15～85℃寬溫度范圍,研究了蛋白質在固定Zn2 +金屬螯合色譜系統中的熱行為和變性熱力學。實驗結果表明,蛋白質在色譜過程都有一個固定的熱轉變溫度: 核糖核酸酶(RNase) 、α2胰凝乳蛋白酶原A(α2Chy)的熱轉變溫度約為55℃,細胞色素C (Cyt2C)和溶菌酶(Lys)約為65℃; ,熱轉變溫度的出現標志蛋白質構象發生變化;利用Van′tHoff作圖測定了蛋白質在色譜系統熱變性時的標準焓變ΔH°和標準熵變ΔS°,提
出用標準熵變ΔS°和自由能變ΔG°判斷蛋白質構象變化;利用ΔH°2 ΔS°的線性關系估算了蛋白質熱變性時的補償溫度,鑒定了蛋白質各變體在金屬螯合色譜中保留機理的同一性, RNase、Cyt2C、Lys和α2Chy的補償溫度分別為55℃、65. 8℃、65. 2℃和54. 8℃;根據蛋白質熱變性時的補償溫度和構象變化熵變Δ (ΔS°)的大小,討論了蛋白質在陽離子交換色譜和固定Zn的金屬螯合色譜體系中的熱穩定性。實驗證明,在IDA裸柱引入Zn2 +后蛋白質在色譜系統中的熱穩定性減小,平均補償溫度從65. 3℃降低到59. 7℃,而構象變化熵變的絕對值大幅度升高。