人胎盤來源的金屬蛋白酶抑制因子23 的分離純化及性質研究

摘要　目的　首次從人胎盤中分離純化了天然型TIMP23 ,并建立了TIMP23酶聯免疫測定方法。方法　人胎盤來源的TIMP23 的純化,首先利用4Mol/ L 尿素Tris 緩沖液(pH8. 0) ,在除去多數水溶性蛋白的胎盤勻漿液中提取難溶性蛋白,然后經過CM52 陽離子交換樹脂和Sephacryl S2200 凝膠過濾二步柱層析。結果　SDS 聚丙酰胺凝膠電泳顯示最后分離結果,分別為27KD 和24KD 的兩條蛋白帶。Western blotting 結果表明,分子量為27KD 蛋白為N 末端糖化的TIMP23 、分子量為24KD 的蛋白為非糖化的TIMP23 、兩者的比例約為1∶3 。對比尿素抽提液TIMP23 的純化產率為24 % ,純化倍數約為3200 倍。結論　純化的天然型TIMP23 對MMP21 有明顯的抑制活性。非糖化的TIMP23 IC50為1. 1 ×10 - 10M ,糖化的TIMP23 IC50為1. 2 ×10 - 10M ,顯然比重組TIMP23 對MMP21 的抑制活性要高許多(rTIMP23 的IC50為1. 2 ×10 - 8M) 。研究表明, TIMP23 對某些腫瘤轉移有明顯的抑制效應。此項研究對進一步闡明MMPs 和TIMPs 在機體內平衡關系的改變對腫瘤浸潤轉移的影響作用有著重要的意義。