激光顯微切割結合蛋白質組學技術分析DDAH21在肝細胞癌表達的變化

[摘　要] 　目的: 應用激光顯微切割( laser cap ture microdissection,LCM)結合蛋白組學技術篩查肝細胞癌( hepatocellular car2cinoma , HCC)組織及其癌旁組織的差異表達蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1 ( dimethylargininedimethylaminohydrolase1,DDAH21)在肝細胞癌表達的變化。方法: 選取2003 - 2006年間東方肝膽外科醫院原發性肝細胞癌患者的手術切除標本40例。利用LCM技術分離捕獲肝癌組織及癌旁組織的肝實質細胞,應用二維凝膠電泳技術( two dimensional gel electrophore2sis, 22DE)篩選全部標本共同差異表達頻率> 80%、差異強度> 3倍的蛋白質點;應用電噴霧串聯質譜( electrosp ray ionisationtandem mass spectrometry, ESI2MS/MS)及基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(matrix2assisted laser desorp tion / ionization time of flightmass spectrometry,MALD I2TOF2MS) 對差異蛋白點進行質譜鑒定分析; 采用Western blotting及免疫組化對差異蛋白DDAH21進行檢測。結果: 22DE篩查獲得在肝癌及癌旁組織差異表達的蛋白質點共20個,通過質譜鑒定獲得12個蛋白質,其中5個在肝癌組織表達上調, 7個下調;這12個蛋白質與細胞代謝、增殖、分化及信號調控相關,其中的DDAH21是參與調控一氧化氮相關通路的重要酶。Western blotting檢測顯示, 20例標本中16例DDAH21表達明顯升高;免疫組化檢測證實, 10例標本DDAH21全部呈強陽性表達。結論: 肝細胞癌組織細胞中篩查到12個差異表達蛋白質,其中的DDAH21在肝癌組織中表達上調,其有可能在肝癌發生、發展過程中起重要作用。