圈卷產色鏈霉菌硝基烷類氧化酶的分離純化及酶學性質

摘　要:圈卷產色鏈霉菌硝基烷類氧化酶基因naoA 在大腸桿菌中獲得了成功表達,從含有重組質粒pNA101(pET23b ∷naoA) 的工程菌株BL21 (DE3) 中分離純化了硝基烷類氧化酶,SDS2PAGE 檢測為均一。對純酶進行了酶學性質及動力學研究。底物為12硝基丙烷、22硝基丙烷和硝基乙烷時,在014molPL 的磷酸緩沖液中,酶的最適反應pH 值為7～8 ,最適反應溫度為48 ℃～56 ℃。室溫保存6d 后,酶的活性保持了4313 % ,但對60 ℃以上的高溫敏感。硫醇化合物如巰基乙醇、還原型谷胱甘肽不同程度地抑制酶活性,特別是NADH ,其濃度為1mmolPL 時,酶活性幾乎全部喪失。以12硝基丙烷為底物時, NaoA 的Km 為3517mmolPL , Vmax 為01199μmolP(μg. min) 。