豬乳中一高分子量蛋白質的分離純化和鑒定

摘　要: 對豬乳中一高分子量蛋白(HMWP) 進行了分離純化,并對其某些生化性質進行了鑒定。豬乳通過去脂得到脫脂乳,再去除酪蛋白得到乳清。對乳清進行硫酸銨分級鹽析,豬乳中HMWP 在40 %飽和度硫酸銨鹽析下有最大沉淀。收集40 %飽和度硫酸銨鹽析沉淀,經過溶解、透析得到HMWP 的粗品。通過Mono Q 離子交換柱,對其粗品進行兩次層析提純,得到了HMWP 純品,其純度和得率分別為97. 85 %和12. 31 %。多種植物凝集素的Westernblotting 鑒定表明,HMWP 是一個糖基種類較少的糖蛋白,含有Man 和GlcNAc。SDS2PAGE 和凝膠過濾分別測得HMWP 的分子量為114. 8 kD 和115. 0kD。通過等電點測定,HMWP 的pI 為5. 10。HMWP 的氨基酸組分分析得知,其富含Asp 、Glu、Gly 和Cys ,疏水性氨基酸較低,僅占15. 59 %摩爾分數。這些結果說明HMWP 是一個易溶于水的、酸性的分泌性單體球蛋白。N 端氨基酸序列測定結果為Ala2Leu2Val2Gln2Ser2Gly2Leu2Asn2Leu2Val , 通過從網絡Genbank 檢索沒有發現其同源蛋白的序列,說明其可能是一個新蛋白。