人瘦素在畢赤酵母中的表達及其分離純化

【摘　要】目的：為了獲得人Leptin（瘦素或瘦蛋白）而進一步研究其生理作用、作用機制與病理意義。方法：采用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法，從人腹部皮下脂肪組織中分離脂肪細胞總RNA，經逆轉錄、PCR擴增出肥胖基因的編碼序列
（Ob基因cDNA），再克隆到表達載體pPICZα中，在畢赤酵母菌株GS115中表達。結果：PCR的擴增產物長度為462bp，克隆后的表達產物，經SDS-PAGE證實，約為分子量為17kD的特異蛋白條帶，與人瘦素的理論預計值相符合，經放免法測定，表達量達到36mg/L。通過其多聚組氨酸接頭與金屬鎳螯合的親和層析法純化表達蛋白，在SDS-PAGE上呈現分子量為17kD的單一蛋白條帶。結論：通過基因工程手段已成功表達出人瘦素并分離純化得到純度較高的人瘦素。