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  • 人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗體的表達、純化及初步鑒定

    上一篇 / 下一篇  2008-10-18 12:08:20/ 個人分類:基因

    • 文件版本: V1.0
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    • 文件來源: 本地
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    【摘要】 目的 對人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗體進行表達純化及初步鑒定。方法 用含Fc 片段抗2HBsAg Fab 抗體基因的載體pAC2HBs2Fc ,與桿狀病毒線性DNA 共轉染昆蟲細胞sf9 ,產生重組抗2HBsAg 的全抗體。以不同濃度的HBsAg 包被酶標板孔,用間接ELISA 法檢測培養上清中抗體的表達及特異性;用蛋白G親和層析柱進行抗體的純化,并對純化的抗體進行SDS2PAGE、Western blot 和競爭性ELISA 分析。結果 上清中表達的重組IgG抗體僅與HBsAg 呈陽性反應,特異性良好,純化后其純度達97. 1 %。經SDS2PAGE 和Western blot 分析可見, IgG抗體輕鏈和重鏈的相對分子質量分別約為27 000 和55 000 ,為人源IgG抗體。CHO 表達的HBsAg 和血源性HBsAg 能競爭性抑制該重組IgG抗體與E. coli 表達的HBsAg 反應,其抑制率分別為55. 9 %和81. 9 %。結論 人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗體可在桿狀病毒載體表達系統中成功表達。



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    TAG: 純化表達桿狀病毒

     

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