利用his2tag 純化和復性基因工程產物腸激酶

摘　要: 構建了融合表達腸激酶輕鏈( EKLC) 的基因工程大腸桿菌,將該菌于37 ℃在含30 mg/ L卡那霉素的LB 培養基中培養,當細胞密度(OD600 ) 達到015～016 時加入最終濃度為014 mmol/ L的IPTG并降溫至26 ℃進行誘導表達,4 h 后目的蛋白質的表達量可達菌體總蛋白質的40 %以上,但所表達的重組產物大多以包涵體形式存在于菌體中。利用產物N 端攜帶6 個組氨酸標簽與金屬螯合層析介質中鎳離子的親和性,應用鎳離子金屬螯和層析對樣品包涵體進行了純化和復性研究。實驗結果表明,在變性條件下純化的樣品在柱上不經洗脫,直接用復性液洗滌6 h ,可以使EKLC 在得到提純的同時實現復性,得到了電泳純度為96 %的具有生物活性的EKLC ,最高活性為712 U 。