利用序列特異性DNA 親和層析分離純化一種前列腺細胞核蛋白

內容提要　目的:分離純化RFA 結合蛋白并加以鑒定,為進一步深入研究RFA 及其結合蛋白相互作用和參與AR 介導的PSA 基因表達奠定基礎。方法:培養人前列腺癌細胞PC23 ,提取核蛋白,以RFA 序列為探針進行親和層析分離純化目的蛋白,層析前后均用電泳遷移率變動分析( EMSA) 檢測目的蛋白的功能。經SDS2PAGE 測定純化蛋白的分子量,然后切下目的蛋白條帶,進行蛋白質鑒定。結果:純化蛋白在SDS2PAGE 圖譜上36kD 附近呈現單一條帶,氨基酸組成分析和質譜分析顯示純化蛋白條帶含有2 種蛋白,與核內不均一核糖核蛋白A1 , A2 (hnRNPA1 , A2) 高度同源。結論: ①以Dynal M2280 鏈親和素磁珠為固相介質的DNA 親和層析,具有簡便、快速、無毒的優點,可在對目的蛋白了解甚少的條件下,以較高的純度將其純化; ②RFA 結合蛋白與hnRNP 超家族成員hnRNPA1 , A2 高度同源,其與RFA 相互作用的具體機制和意義有待進一步研究。