SMMC-7721 肝癌細胞67 kD 層粘連蛋白受體的分離純化

摘要　分離純化肝癌細胞的67 kD 層粘連蛋白受體(67LR) ,以便進一步研究67LR 的結構、功能及其在肝癌浸潤、轉移過程中的作用. 以SMMC-7721 肝癌細胞和L202 正常肝細胞為材料,采用131 I 標記的層粘連蛋白測定其與細胞的結合能力;親和層析法分離純化層粘連蛋白受體,用SDS2PAGE、放射自顯影及體外競爭結合實驗進行鑒定. 在相同條件下SMMC-7721 肝癌細胞與層粘連蛋白特異結合量為17154 ±0149 ngP105 細胞,而L202 正常肝細胞與層粘連蛋白的特異結合量為8136 ±0148 ngP105 細胞. 經過親和層析,從SMMC-7721 肝癌細胞和L202 正常肝細胞均可獲得純化受體,SDS2PAGE顯示為單一條帶,分子量為67 kD ,放射自顯影及體外競爭結合實驗表明其具有較強的與層粘連蛋白結合的活性. 體外競爭結合實驗表明,SMMC27721 肝癌細胞層粘連蛋白受體(7721LnR) 的抑制率可達到96127 ±2129 % ,而L202 正常肝細胞層粘連蛋白受體(L202LnR) 的抑制率為48171 ±3179 % ,這說明7721LnR 與層粘連蛋白的親和力明顯高于L202LnR( P < 01001) . 結果表明,與L202 肝細胞比較,SMMC27721 肝癌細胞具有與層粘連蛋白較強結合能力的特異受體,并從肝癌細胞膜上分離純化到與層粘連蛋白有較強親和力的67LR.