大腸桿菌表達重組人IL - 8 分離純化工藝的建立

摘要　目的　建立重組人IL - 8 ( rhIL - 8) 大腸桿菌表達后的高效分離純化工藝,以便獲得高純度的重組蛋白。方法　將已構建好的表達載體轉化大腸桿菌HB101 ,經IPTG誘導進行高效表達。將離心收集到的菌體用超聲破壁分離,收集包涵體和胞漿,其中包涵體部分經變性和復性處理后,與胞漿部分合并,進行肝素親和層析柱分離,再經離子交換柱和凝膠層析柱過濾,得到最終純品。蛋白純度用SDS - PAGE 鑒定,EL ISA 法檢測重組IL - 8含量。檢測純化后重組蛋白的生物學活性和熱源質。結果　用大腸桿菌HB101 表達重組人IL - 8 ,具有較高的表達量(25mg/ ml) ,其分泌的重組蛋白以包涵體和胞漿的形式存在。經多步柱層析純化后,可獲得高純度的重組IL- 8 蛋白(純度> 95 %) 。該蛋白在體外具有趨化中性粒細胞游走的作用,兔溫法檢測熱源質含量符合要求。結論大腸桿菌可高效表達rhIL - 8 ,該工藝流程可從大腸桿菌載體中獲得具有生物學活性的高純度rhIL - 8。