表達豬源鏈球菌類M-MRP 融合蛋白基因工程菌的構建及免疫保護試驗

摘要: 利用PCR 技術, 分別擴增馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus ) ATCC35246 株類M szp 基因583~1063 位堿基和豬鏈球菌(S.suis)2 型HA9801 株mrp 基因298~827 位堿基的片段。通過在類M 基因片段的3! 端和mrp基因片段的5! 端引物添加共同的SacⅠ酶切位點, 利用T4 連接酶連接, 克隆至pET-32a(+)載體。將重組質粒轉化大腸桿菌(Escherichia coli ) BL21, 經IPTG 誘導, 可獲得分子量約為60 kD 的融合蛋白。通過MRP 和類M 蛋白的多克隆抗體進行ELISA 反應和免疫印跡分析表明: 表達的融合蛋白同時具有類M 蛋白和MRP 的抗原性。用組氨酸親和層析柱純化的重組融合蛋白, 和鏈球菌的全菌二聯滅活疫苗分別免疫兩組仔豬, 重組蛋白的免疫保護率達60"。