骨髓基質干細胞的誘導分化 1.成軟骨誘導骨髓基質干細胞培養7天后，加入軟骨誘導液，誘導因子終濃度為TGF-p1 10ng/m1、IGFl00ng/m1、地塞米松0.1/1m01/L，轉鐵蛋白6.25ug/ml，誘導時間為2-4周。 2.成骨誘導(1)骨髓基質干細胞培養7天后，加入成骨誘導液。誘導液成分為基礎培養液加入10mmo]/Lβ-磷酸甘油、10nmol/L維生素D3等誘導成分。(2)特殊染色vonKossa染色：誘導4周，4％多聚甲醛室溫固定30rain，蒸餾水沖洗，加入1％(W/V)硝酸銀溶液，避光30min，加入0.1mmol/L硫代硫酸鈉1h，蒸餾水沖洗，干燥封片。礦化結節呈現黑色。設誘導組、非誘導組、檸檬酸處理組。此方法用于特異性檢測鈣化結節形成能力。AlizarnRed染色：誘導3～4周，4％多聚甲醛室溫固定30min，蒸餾水沖洗，加入0.1％AlizarnRed-Tris-HCL溶液(pH 8.3)，室溫10min。蒸餾水沖洗，干燥封片。鈣鹽沉積處呈紅色。 3.成脂肪誘導(1)骨髓基質干細胞培養7天后，吸去培養液，PBS輕輕沖洗后，加入成脂肪誘導液，其成分為基礎培養液和0.5mmol/LIBMX、1umol/L地塞米松、10umol/L胰島素、200/~mol/L吲哚美辛等，每4天更換培養液。倒置顯微鏡觀察細胞形態的變化(有無脂滴形成)。(2)特殊染色油紅染色：誘導2-3周進行油紅染色，以觀察細胞脂滴形成情況。染色前，細胞經4％甲醛4~C固定1h，70％異丙醇清洗，2％油紅試劑室溫放置5-10min，?0％異丙醇洗去多余的染料，蒸餾水洗滌，蘇木精染色2rain。染色過程中，細胞絕對不要脫離液體環境超過30s，否則實驗很難成功。