一、材料準備

4μL5X T4激酶緩沖液

5 μl [γ-32P] ATP（7000次/毫摩爾）

10 μl 水+寡核苷酸（200毫微克）

1 μl T4激酶

1. 37攝氏度1小時 2. 熱失活，在75℃下10分鐘。 3. 加入1 μl 糖原（20毫克/毫升），2 μl 4M乙酸銨，90 μl 的乙醇。

4. 重懸沉淀，26 μl 水，并加入26 μl 4M醋酸銨，110 μl 乙醇。

5. 重懸沉淀，在5 μl 的水混合。

二、實驗步驟

PCR產生的單鏈DNA探針 20 μl 消化的質粒（切5 μg 質粒的體積為20 μl）5 μl 標記的寡核苷酸10 μl 10X Taq緩沖液6 μl 25 mM MgCl2的10 μl DMSO 2 μl 10 mM 的dNTP 1μL Taq DNA聚合酶的PCR 14個循環運行在6%至8%聚丙烯酰胺/尿素凝膠切出探頭和洗脫S1映射 。

1. 共沉淀物的RNA + 1E4 cpm的探針，通過調整最終體積至100 μl，0.3M的醋酸鈉和鹽。加入250 μl 乙醇。

2. 沉淀用70%乙醇和干燥的速度VAC 2分鐘洗凈。不要過干，雜交，在一個單獨的管預混合鹽（4 μl 的預混合/ RXN）：預混合：2微升5M氯化鈉1.6 μl 0.5M PIPES，pH值7.0 0.2 μl 0.1M EDTA，pH值7.0 0.2μl水。

3. 以下內容添加到您的樣品：16 μL甲酰胺4 μl 預混合鹽。

4. 渦蓬勃發展。

5. 孵育，100℃，3分鐘。

6. 立即轉移到58℃，孵育過夜。S1消化緩沖液（最終濃度）：300 mM 的NaCl 的30 mM 醋酸鈉，pH5.5 2 mM 的硫酸鋅1000單位/ ml 對于1 ml 的消化緩沖液中的S1核酸酶：加入60μl5M NaCl溶液中10 μl 3M醋酸鈉，pH 5.5的20 μl 0.1 M 硫酸鋅2.5 μl S1核酸酶（400U /μl）907.5 μl 的水。

7. S1消化緩沖液中加入200 μl 的樣品。

8. 在37攝氏度下孵育45分鐘。

9. 加入1微升糖原（20 mg/ml），500 μl 的EtOH中，在冰上沉淀15分鐘。

10. 4攝氏度旋轉30分鐘。

11. 用70%的乙醇進行清洗。

12. SpeedVac離心，加入5 μl 甲酰胺上載染料（5X TBE，45%甲酰胺，0.25%溴酚藍）。煮沸3分鐘，并放置在冰上。

13. 樣品。運行在6-8%丙烯酰胺凝膠，干凝膠，并揭露電影。