PFEG（Plused-Field Gel Electrophoresis）技術是將細菌完全包裹在一種特殊的瓊脂中，然后加入一些化學試劑，比如十二烷基肌氨酸鈉，蛋白酶K等，將細菌中的蛋白成分全部溶化，消化，只剩下整個序列的DNA。經稀有限制性內切酶消化后，切割成大小不等的片斷，然后將其置于脈沖場電泳槽中電泳，完成片段分離的過程。

經染色脫色后，在讀膠儀上顯現酶切后的電泳圖譜，并經統計軟件的分析，即可判斷出條帶的不同，同時做出細菌的同源性分析，從而達到分型的目的。其中能影響電泳圖譜的參數很多，如電泳的轉換時間，電泳的總時間，電泳的角度，電壓，電泳液的溫度等等，且不同的參數會得到不同的電泳圖譜。

Pulsed Field Gel Electrophoresis Short Protocol

1. Reagents

1.1 Tris-EDTA Buffer （10mM Tris： 1mM EDTA， pH 8.0）.

- 10ml of 1M Tris， pH 8.0

- 2ml of 0.5M EDTA， pH 8.0

- Dilute to 1000ml with molecular grade water.

1.2 Cell Suspension Buffer （CSB）. （100mM Tris：100mM EDTA， pH 8.0）.

- 10ml of 1M Tris， pH 8.0

- 20ml of 0.5M EDTA， pH 8.0

- Dilute to 100 ml with molecular grade water.

1.3 InCert agarose for plugs （1.6% InCert： 1% SDS agarose in TE）.

- Weigh 0.8g InCert agarose into a 250 ml screw-cap flask

- Add 46.7 ml TE Buffer； swirl gently to disperse agarose.

- Microwave for 30 sec.， mix gently and repeat for 10 sec.

- Place flask in 55-60℃ water bath for 5 min before adding SDS.

- Add 2.5 ml of 20% SDS and mix well.

- Keep at 55-60oC water bath until ready to use.

1.4 Cell Lysis Buffer （50mM Tris：50mM EDTA， pH， 8.0 + 1% Sarcosine）.

- 25 ml of 1M Tris， pH 8.0

- 50ml of 0.5M EDTA， pH 8.0

- 50ml of 10% N-Lauryl Sarcosine.

- Dilute to 500 ml with sterile type 1 water.