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    DNA電泳常見問題分析

    關鍵詞: 來源: 威斯騰

    DNA電泳的MARKER怎么是扭曲的?1、 配制膠時的緩沖液需要和電泳緩沖液不是同時配制的.最好是同時配制.電泳時緩沖液高過液面1-2mm即可。

    2、 電泳時電壓過高,可以在電泳前15分鐘用較低電壓(3V/cm),等條帶出孔后比較漂亮了.然后再調電壓。

    3、 上樣時盡量慢慢加樣,等樣品自然沉降后再加電壓。 跑出的DNA帶模糊?1、DNA降解:避免核酸酶污染。

    2、 電泳緩沖液陳舊:電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果。建議經常更換電泳緩沖液。

    3、 所用電泳條件不合適:電泳時電壓不應超過20V/cm,溫度<30℃;巨大DNA鏈電泳,溫度應<15℃;核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。

    4、DNA上樣量過多:減少凝膠中DNA上樣量。

    5、DNA樣含鹽過高:電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽。

    6、 有蛋白污染:電泳前酚抽提去除蛋白。

    7、DNA變性:電泳前勿加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA。 有不規則DNA帶遷移?1、 對于λ/Hind III片段cos位點復性:電泳前于65℃加熱DNA 5分鐘,然后在冰上冷卻5分鐘。

    2、 電泳條件不合適:電泳電壓不超過20V/cm;溫度<30℃;經常更換電泳緩沖液。

    3、DNA變性:以20mM NaCl Buffer稀釋DNA,電泳前勿加熱。 跑出的DNA條帶帶弱或無DNA帶?1、DNA的上樣量不夠:增加DNA的上樣量;聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高,上樣量可適當降低。

    2、DNA降解:避免DNA的核酸酶污染。

    3、DNA走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度。

    4、 對于EB染色的DNA,所用光源不合適??應用短波長(254nm)的紫外光源。 跑出的DNA帶缺失不完整是怎么回事?1、 如果是小DNA帶走出凝膠,可以縮短電泳時間或降低電壓或增強凝膠濃度。

    2、 分子大小相近的DNA帶不易分辨??增加電泳時間,核準正確的凝膠濃度。

    3、DNA 變性:電泳前請勿高溫加熱DNA鏈,以20mM NaCl Buffer稀釋DNA。

    DNA鏈巨大,常規凝膠電泳不合適??在脈沖凝膠電泳上分析。 凝膠回收DNA實驗的關鍵在哪里?最關鍵的是切膠之后,溶膠的那一步.切膠的時候要盡量把多余的瓊脂糖凝膠切干凈,按照實驗步驟,第一步應該是將膠充分的溶化.這以后步一定要做充分,保證凝膠已經完全溶解了.加乙醇這步也很關鍵,當凝膠溶解后最好多過幾次柱子。

    還有就是洗脫的那一步。洗脫的時候最好用加熱到60度的洗脫液洗脫,如果實在效果不好可以分兩次洗脫。 切膠的時候如何能切的準呢?條帶的位置肉眼很難判斷出來,如何判斷條帶的位置呢?可以將產物與Marker一起電泳,染色后,在紫外燈下觀察結果,跟Marker進行相比,就知道要的是哪條帶。注意,紫外燈下切膠速度要快,否則DNA會降解,另外,紫外線對身體傷害很大,特別是眼睛,請注意采取保護措施(比如在專門的箱子里切,帶眼鏡等)。

    RNA 用具要用10%的NaOH浸泡過液,再用DEPC水沖洗干凈70%的乙醇用過 國產分析乙醇有雜質,RNA酶還會有,并帶入其它污染。

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