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硝酸銀染色
關鍵詞： 硝酸銀 銀染 注意事項來源： 互聯網
銀染的方法種類很多，目前有文獻報道的就有 100 多種。但是其準確的染色機制還不是特別的清楚。大致的原理是銀離子在堿性 pH 環境下被還原成金屬銀，沉淀在蛋白質的表面上而顯色。
由于銀染的靈敏度很高，可染出膠上低于 1 ng/蛋白質點，故廣泛的用在 2D 凝膠分析上。待找到自己感興趣的蛋白質點后，再通過考染富集該目的點，然后做進一步的肽段指紋圖譜分析（PMF）或序列測定。隨著質譜技術的不斷完善和發展，對銀染后的 f mol 級的蛋白質點直接測定已非難事。這里介紹一種可兼容質譜分析的銀染方法，實驗程序如下：
| Step | Solution (250ml per gel) | Gel Type | |
|---|---|---|---|
| 固定 | 25ml acetic acid, 100ml methanol 125ml milli-Q water | 1mm unbacked 2x15 min | 1mm on film or glass support or 1.5 unbacked 2x60 min |
| 敏化 | 75ml methanol, 0.5g Na2SO3, 17g NaAc, milli-Q water to 250ml | 30 min | 60 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 3x5 min | 5x8 min |
| 銀染 | 0.625g AgNO3, milli-Q water to 250ml | 20 min | 60 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 2x1 min | 4x1 min |
| 顯色 | 6.25g Na2CO3 , 100μ formaldehyde, milli-Q water to 250ml | 4 min | 6 min |
| 終止 | 3.65g EDTA, milli-Q water to 250 ml | 10 min | 40 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 3x5 min | 2x30 min |
銀染注意事項：
1. 很多銀染程序都使用了戊二醛（glutardialdehyde），它能提高銀染的靈敏度和染色結果的重復性，但是因為戊二醛會修飾蛋白質，從而會影響對蛋白質點的質譜鑒定和分析；
2. 保證所有的染色器皿絕對的干凈，可使用玻璃或塑料做染色器皿；
3. 水的純度對染色結果好壞影響是很大的，至少要用雙蒸水（導電率<2μS），有條件的可使用 Millipore water；
4. 染色過程中避免手去接觸凝膠，必須戴上一次性手套或無粉乳膠手套；
5. 所用的化學試劑一定是要分析純 （ AR ）。
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