葡萄酒中甜蜜素的含量測定GCMS法

      甜蜜素（環己基氨基磺酸鈉）是一種甜味劑，甜度是蔗糖的5O倍。目前，我國允許甜蜜素作為食品添加劑在多種食品中使用，在GB276001996《食品添加劑使用衛生標準》中對添加量作出明確的規定，葡萄酒中添加的最高限量為0.65s/kg。但有些生產廠家為了降低成本和改善口感，在葡萄酒中超量加入甜蜜素，損害了消費者的身體健康。食品中環已基氨基磺酸鈉（甜蜜素）的測定標準是GB/TS009.97-2003 ，該標準規定了食品中環已基氨基磺酸鈉的三種測定方法-氣相色譜法、比色法、薄層層析法，其中氣相色譜法采用填充柱。

      本研究利用毛細管氣相色譜法測定葡萄酒中的甜蜜素，并對葡萄酒中甜蜜素提取方法作了改進，采取直接離心而無需將存在于正己烷中的環己醇亞硝酸酯取出后再離心，簡化了前處理過程，縮短了分析時間。回收率試驗結果表明，本方法準確可靠。應用本方法對36份葡萄酒樣品中甜蜜素進行了檢測，并對不合格葡萄酒樣品進行了質譜確認。

1 材料與方法
1.1 儀器和試劑

Agilent6890N／5973N氣相色譜-質譜儀（Agilen公司），Agilent6890N氣相色譜儀（Agilent公司），帶FID，配備7683自動進樣器和增強型化學工作站；CENMTRIKON T-124高速冷凍離心機（Kontron公司）。正己烷（分析純，用全玻璃蒸餾裝置重蒸餾）、氯化鈉（分析純百分之650 灼燒4h）、三重蒸餾水。標準溶液配制：甜蜜素標準品（Dr．Ehrenstorfer公司）用三重蒸餾水配制成10mg/ml標準儲備液。

1.2 色譜、質譜分析條件

氣相色譜采用DB-1毛細管色譜柱，30 m×0.25mm×0.25um（膜厚），分流/不分流進樣口，進樣口溫度l5O攝氏度，脈沖不分流進樣；載氣：高純氮氣（純度百分之99.999），流速1.0ml/min；程序升溫：5O攝氏度 保留0.75 min，以45攝氏度/min升至95攝氏度，保留1min，再以40攝氏度/min升至115攝氏度，保留0.5min，再以3O攝氏度/min升至145攝氏度，保留1.25 min，全部程序時間6.0min；FID溫度200攝氏度，氫氣：30ml/min，空氣：400ml/min，補償氣：氮氣，流速為35ml/min；自動進樣，進樣量1 ul 。

質譜采用EI方式：EM 電壓為自動調諧值，電離能量7OeV，離子源溫度230攝氏度，四極桿溫度l5O攝氏度，接口溫度280攝氏度；掃描方式：全掃描，掃描質量（m/z）范圍：5O～300；溶劑延遲時間為2.6min。采用HP-5MS毛細管色譜柱，30 m×0.25 mm×0.25um（膜厚），分流/不分流進樣El，進樣El溫度200攝氏度，脈沖不分流進樣；載氣：高純氦氣（純度百分之99.999），流速1.0ml/min；程序升溫：60攝氏度 保留lmin，以1O攝氏度/min升至100攝氏度，再以40攝氏度/min升至180攝氏度，全部程序時間7.0min；自動進樣，進樣量ul。

1.3 標準曲線的制作
分別準確吸取10ms/ml甜蜜素標準儲備液0.02、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 ml于100 ml具塞聚乙烯離心管，加水至2Oml，置冰浴中，然后按1.4自“加入5ml 5Og/L亞硝酸鈉溶液”起操作。當葡萄酒取樣量為2O.0 g時，分別相當于0.O1、0.05、0.25、0.50、1.00、2.5Og/kg。以甜蜜素的濃度為橫坐標（x），相對應的峰面積為縱坐標（Y）得出回歸方程：Y為7432.1 X-3O.8，r為0.99987。

1.4 樣品處理
準確稱取20.0 g去除酒精的葡萄酒樣品于100 ml具塞聚乙烯離心管，置冰浴中，加入5ml 5Og/L亞硝酸鈉溶液，5ml 100g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經常搖動，然后準確加入10ml正己烷，5g氯化鈉，振搖8O次，然后4000 r/min離心10min，用吸管取出上層正己烷供氣相色譜分析。

2 結果和討論
2.1 樣品處理方法的改進

GB/T5009.97-2003中的樣品處理方法為：準確稱取20.0 g去除酒精的葡萄酒樣品于100ml帶塞比色管中，置冰浴中，加入5ml 5Og/L亞硝酸鈉溶液，5 ml 100s/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經常搖動，然后準確加入10ml正己烷，5g氯化鈉，振搖8O次，待靜置分層后吸出上層正己烷于10ml帶塞離心管中進行離心分離，上層正己烷供氣相色譜分析。在實際測定中，由于樣品處理過程中產生大量的泡沫，靜置后易形成乳化，無法分層，很難吸出上層正己烷。本文采用1.4樣品前處理方法，簡化了操作步驟，縮短了樣品前處理的時間，同時解決了乳化不分層的難題。

2.2 實驗中注意事項
樣品處理過程中，加入5 ml 50g/L亞硝酸鈉溶液，5ml 100g/L硫酸溶液，搖勻，應注意開始振搖時應緩慢，并不時打開離心瓶蓋放氣，以免離心瓶蓋被沖開，液體飛濺，造成人身損害及實驗事故。