應用蛋白質組學技術研究反義Cyclin B1 的抗腫瘤作用機制

【摘要】背景與目的: 先前研究發現采用反義技術下調cyclin B1 基因表達水平,可產生抗腫瘤的作用, 但其抗腫瘤機制有待進一步研究。本研究旨在利用比較蛋白質組學的方法來探討反義cyclin B1 抗腫瘤作用的分子機制。方法: 首先用含有小鼠cyclin B1 反義全長cDNA 的重組質粒轉染小鼠CT26 結腸癌細胞, 經雙向凝膠電泳( 2-DE) 分離轉染組和未轉染組的總蛋白, 再用PDQuest 圖像分析識別2-DE 膠圖像, 然后對差異表達的蛋白質點進行基質輔助激光解吸電離飛行時間(MALDI-TOF-MS) 質譜分析, 再經Mascot 軟件搜索數據庫鑒定這些差異蛋白。最后根據被鑒定肽段的可信度, 從這些蛋白質中選出肽段可信度最高的2 個, 用Western blot 對其豐度差異進行了驗證。結果: 初步鑒定出7 個差異表達蛋白, 其中Axin2、CCTθ、DR5 和HPCM27 蛋白質在實驗組上調, RFP17、mKIAA1195 及LOC77035 蛋白在實驗組下調, 而可信度最高的Axin2 和DR5 的蛋白質表達豐度差異為Western blot 所證實。結論: 多種蛋白質在反義cyclin B1 后表達有明顯差異, 這些差異蛋白質參與細胞的增殖、分化、遷移、凋亡及轉錄調控等多條信號通路, 提示反義cyclin B1 的抗腫瘤機制可能與上述蛋白質的作用有關。