應用蛋白質組學和RNAi 技術篩選鼻咽癌細胞中p53 功能相關蛋白質

摘要 為了闡明鼻咽癌中高表達的p53 蛋白聚集與失活的機制，高通量地檢測與p53 功能相關的蛋白質，首先采用RNA 干擾(RNAi)技術穩定沉默鼻咽癌細胞系CNE2 的p53 基因表達，然后用蛋白質組技術研究穩定沉默該基因對鼻咽癌蛋白質表達譜的影響. 通過對穩定干擾p53 基因后鼻咽癌細胞系CNE2 的蛋白質表達譜改變的研究，用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)分析和電噴霧串聯質譜(ESI-Q-TOF-MS)驗證鑒定了22 個差異表達蛋白質. 在這些差異表達蛋白質中，有些是已經報道的p53 功能相關蛋白質，如熱休克蛋白27(HSP27)、異質性胞核核糖核蛋白K(hnRNPK)、14-3-3σ等，其他可能是新的p53 功能相關蛋白質，如eIF4B、TPT1、hnRNPH3、SFRS1 等. 部分差異表達蛋白質如HSP27、14-3-3σ和GRP75 經蛋白質印跡分析技術進行了驗證，同時pcDNA3.1-FLAG-p53 質粒轉染CNE2 細胞引起了HSP27、14-3-3σ表達下調，GRP75 表達上調. 在鼻咽癌細胞中鑒定的22 個差異表達蛋白質大致可以分為5類，包括信號傳導相關蛋白質、分子伴侶、與轉錄和翻譯相關蛋白質、代謝相關蛋白和細胞結構相關蛋白質，涉及到細胞周期的調控、分子基因表達調控、細胞黏附、細胞代謝等眾多事件，它們可能作為p53 功能相關蛋白質，為闡明鼻咽癌中p53 蛋白聚集及失活的機制提供了重要依據和線索.