伴刀豆球蛋白親和色譜柱的制備及其在糖蛋白核糖核酸酶B 結構分析中的應用

摘要:通過對硅膠基質進行化學改性鍵合伴刀豆球蛋白(Con A) ,制備了對糖蛋白具有特異親和作用的親和色譜固定相;該固定相非特異性吸附弱,對于糖蛋白和糖肽的分離效果良好。對親和色譜的分離條件進行了優化,以標準糖蛋白核糖核酸酶B (RN ase B )為模型,對其進行了純化;用糖苷酶切除糖鏈,并對切除糖鏈前后的RN ase B 用胰蛋白酶酶解;用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALD I2TO F MS )對親和色譜分離得到的糖蛋白、糖鏈及糖肽進行了分析,確定了RN ase B 的一級結構、糖含量、糖基化位點及糖連接方式。該方法快速準確,適于糖蛋白和糖肽的分離表征。將其應用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分離富集,取得了很好的效果。