雙向凝膠電泳腦脊液蛋白質提取方法的比較

【摘要】目的對 3 種常用的雙向凝膠電泳腦脊液蛋白質提取方法進行比較，優選腦脊液蛋白質提取方法。方法收集新診斷尚未經藥物治療的 16 例帕金森病患者和 7 例頭痛患者的腦脊液，分別以 3 種不同的方法提取腦脊液中的蛋白質。①透析法：用PluseOne 微透析試劑盒處理腦脊液樣品。②丙酮沉淀法：以冷丙酮溶液處理腦脊液樣
品，丙酮的終濃度為 80%。③三氯醋酸（TCA）/丙酮沉淀法：以 4 倍體積的 10% TCA/丙酮溶液處理腦脊液樣品，TCA 的終濃度為 8%，丙酮的終濃度為 80%。取沉淀物進行雙向凝膠電泳，用銀染法對電泳后的凝膠進行染色，比較經 3 種不同方法提取的腦脊液蛋白質的雙向凝膠電泳圖譜。結果經透析法處理樣品的電泳圖譜顯示的蛋白點較清晰、較圓，條紋較少，但所見幾乎都是高豐度蛋白，低豐度蛋白很難顯現；經丙酮沉淀法處理樣品的電泳圖譜顯示橫豎條紋均較多，大部分蛋白堆積在凝膠的上部，下面的點也顯示不清晰，蛋白點出現橫向漂移；經 TCA/丙酮沉淀法處理樣品的電泳圖譜顯示橫條紋相對較少，低豐度蛋白能較清晰顯現，樣品中所含高豐度蛋白明顯少于以上兩種方法處理的樣品。結論以 TCA/丙酮沉淀法提取蛋白質進行雙向凝膠電泳時聚焦效果較好，而且同時去除了大部分白蛋白，使低豐度蛋白能很好地顯現出來，優于丙酮沉淀法和透析法。