五步蛇毒降纖酶的快速分離與純化

[ 摘要] 　目的　建立快速分離純化降纖酶工藝方法適合于規模化生產。　方法　以五步蛇毒為原料, 采用EDTA 絡合—硫氰酸鉀沉淀初步分離與快速離子交換和凝膠層析純化相結合, 分離純化出符合新部頒標準的降纖酶成分。　結果　經初步分離五步蛇粗毒可使出血毒去除92% , 非類凝血酶(TL E) 成分去除65.17% , TL E 活性回收保持92168% 以上。層析組份中至少含有4 種TL E, 其中1 種為降纖酶成分。初步化學分離, 離子交換柱層析和凝膠過濾制得的降纖酶, 其比活性大于1 200Bu?m g 蛋白, 達1 503Bu?m g蛋白; 每克五步蛇毒干粉可收獲降纖酶2 998.116Bu; 純度達到SDS2PA GE 電泳只在標準蛋白質分子量36000Da 附近呈現單一電泳區帶; HPLC 單一峰。　結論　建立了快速分離純化降纖酶工藝方法, 快速高效, 適合規模生產。