構建小鼠肝細胞磷酸化蛋白質組分析鑒定的方法模型

摘要 背景：磷酸化蛋白質組的分析鑒定是目前蛋白質組學技術研究的主要目標之一，然而以質譜為核心的鑒定技術尚不完善。目的：建立一種簡便易行、適于在一般實驗室普及的分析鑒定磷酸化蛋白質組的方法并應用于小鼠肝細胞磷酸化蛋白質組的模型。設計、時間及地點：觀察對比實驗，于2003-07/2004-06 在瀘州醫學院生物化學教研室及醫學分子生物學實驗室完成。材料：封閉群乳昆明小鼠100 只，年齡1~3 d，體質量3~6 g，雌雄各半；32P-NaH2PO4 由中國北京原子能研究所提供。方法：將長勢相當的體外培養的乳小鼠肝細胞隨機分成兩組。一組作同位素32P 標記后液氮終止反應，裂解細胞，收集蛋白并定量，雙向電泳分離蛋白，干膠及放射自顯影, 建立小鼠肝細胞磷酸化蛋白質組的放射自顯影圖譜，初步確定6 種靶標磷酸化蛋白EPs15 等；另一組直接裂解細胞，收集蛋白并定量，雙向電泳分離蛋白后半干式電轉移至PVDF 膜，根據靶標蛋白EPs15 等的理論等電點和分子量剪下6 張小膜。