ASTM F2944-12
自動菌落形成單位(CFU) 檢驗標準試驗方法.用于培養中列舉和表征細胞和菌落的影像采集與分析方法

Standard Test Method for Automated Colony Forming Unit (CFU) Assaysmdash;Image Acquisition and Analysis Method for Enumerating and Characterizing Cells and Colonies in Culture

被代替

標準號

ASTM F2944-12

發布

2012年

發布單位

美國材料與試驗協會

替代標準

ASTM F2944-20

當前最新

ASTM F2944-20

 

 

適用范圍

依賴于觀察者的手動測定8212；基于依賴于觀察者的標準或判斷對細胞和 CFU 培養物進行手動定量是一項極其繁瑣且耗時的任務，并且受到用戶偏差的顯著影響。為了保持數據采集的一致性，利用基于細胞和集落的測定的藥理學和藥物發現和開發研究通常需要單個觀察者對數百個甚至可能數千個培養物中的細胞和集落進行計數。由于觀察者疲勞，量化的準確性和再現性都會受到嚴重影響 (5)。當采用多個觀察者時，觀察者疲勞會減輕，但由于觀察者偏差以及觀察者內部和觀察者之間的顯著差異，細胞和集落計數的準確性和再現性仍然受到顯著影響 (4, 13)。使用定量自動圖像分析提供集落數量以及每個集落中的細胞數量的數據。這些數據還可用于計算每個集落的平均細胞數。通過手工計數結合細胞數量（例如 DNA 或線粒體）測定來定量集落的傳統方法仍然是一種可行的方法，可用于計算每個集落的平均細胞數。這些傳統方法的優點是目前勞動密集度較低且技術要求較低 (8, 9)。然而，傳統的測定不提供集落水平信息（例如變異和偏差），也不提供從平均集落大小的計算中排除不屬于集落一部分的細胞的方法。因此，當樣品中大量細胞與集落形成無關時，從這些替代方法獲得的每個集落平均細胞數的測量結果可能會有所不同。通過采用最先進的圖像采集、處理和分析硬件和軟件，實現了準確、精確、穩健和自動化的分析系統。應用領域8212；細胞和集落計數（CFU 測定）在基于細胞的再生醫學和細胞治療的制造、質量保證/控制 (QA/QC) 以及產品安全和效力釋放標準的開發中變得尤為重要。 2006 年，美國食品和藥物管理局 (FDA) 發布了一份指導文件，預示了菌落測定在為該行業的上述產品開發步驟建立審核跟蹤方面的重要性 (10)。為了證實該文件，FDA 于 2009 年發布了另一份指導文件，提出集落測定對于再生醫學和治療應用中胎盤和臍帶血干細胞的功能效力的潛在意義 (11)。由于細胞源驗證和 QA/QC 約占細胞療法制造成本的 50% (12)，因此開發一種精確、穩健且經濟高效的細胞和集落計數方法對于該行業的可持續發展和增長至關重要。集落形成單位檢測自動分析的廣泛應用領域包括： 通過將生物潛力和功能效力與 CFU 形成相關聯來表征細胞來源。表征加工步驟或生物或物理操作（例如刺激）對細胞或集落形成的影響。使用特定的熒光和非熒光（分化）標記來表征細胞和集落。外推較大樣本的生物效力（例如分化、增殖等）......

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