不過,應用YAC載體來構建基因組文庫,操作非常繁瑣困難,一般由專門的公司來完成。2.篩選文庫的難易程度黏粒載體一般使用傳統的濾膜影印雜交來篩選,但是這種方法對于構建區域圖譜及疊連群來說既費力又浪費。大容量載體文庫,如P1、PAC、BAC、YAC,以二維陣列保存,既可以用傳統的單拷貝的探針雜交法篩選,又可以用PCR進行多克隆的群體篩選。而且,使用高容量載體構建文庫,可以減少染色體步查的步驟。3....
BAC載體也是很好的選擇,研究者可以利用現有的成熟產品來構建BAC文庫,比如百博明創公司的一系列BAC載體及配套試劑盒。 如果目標區域非常大(大于250kb),那么YAC載體就是首選了。不過,應用YAC載體來構建基因組文庫,操作非常繁瑣困難,一般由專門的公司來完成。 ...
注意:BAC載體連接完以后,需要將連接產物做脫鹽處理,除去連接反應緩沖液里的鹽分。 五、將重組載體轉入宿主細胞 如果構建黏粒文庫,需要用包裝蛋白來包裝上述的連接反應產物,測定包裝好的黏粒克隆的滴度,然后轉染。挑出重組子,鑒定插入片段的大小。如果文庫的大小和質量都令人滿意的話, 就可以鋪板進行文庫篩選,或者擴增、保存文庫。...
注意:BAC載體連接完以后,需要將連接產物做脫鹽處理,除去連接反應緩沖液里的鹽分。五、將重組載體轉入宿主細胞?如果構建黏粒文庫,需要用包裝蛋白來包裝上述的連接反應產物,測定包裝好的黏粒克隆的滴度,然后轉染。挑出重組子,鑒定插入片段的大小。如果文庫的大小和質量都令人滿意的話, 就可以鋪板進行文庫篩選,或者擴增、保存文庫。如果構建BAC文庫,應選擇電轉法,將上述連接產物轉入受體菌,涂板長出克隆。...
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