cDNA文庫構建可以:(1)用于分離全長基因進而開展基因功能研究;(2)篩選目的基因并直接用于表達;(3)提供構建分子標記連鎖圖譜的所用探針。實驗方法原理cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。...
最后將獲得的cDNA文庫與AD載體共轉化進酵母細胞中即可以完成酵母cDNA文庫的構建了。文庫構建好后,可以通過滴度鑒定文庫庫容量,PCR和測序鑒定文庫質量。此外,需要補充的是,通過二鏈與pGADT7共轉酵母獲得的酵母AD文庫,進行篩庫時只能使用mating方法。如果在轉酵母之前,先將cDNA文庫重組到AD載體上再通過大腸桿菌擴增,就可以獲得含有cDNA的文庫質粒和大腸桿菌文庫菌液了。...
總結:C文庫構建的簡單流程為: RNA-mRNA-cDNA單一鏈的合成-cDNA單二鏈的合成-加接頭-與載體連接-體外包裝-轉染-篩選文庫(見總RNA的提取(試劑盒法、氯化鋰法和蛋白酶-熱酚法)、mRNA的提取及純化(磁珠法和親和柱層析法)、cDNA文庫構建技術-cDNA鏈的反轉合成)...
含 1×105個克隆的基因文庫相當覆蓋了 5倍的基因組,在片段隨機分布時,從文庫中找到任一序列的概率不低于0.99。 (二)cDNA文庫 1、概念 cDNA文庫:利用某種生物的總mRNA合成cDNA,再將這些cDNA與載體連接,轉入細菌細胞中進行保存和擴增。 2、cDNA文庫的特點 (1)不含內含子序列。...
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