摘要：蛋白質的一級、二級、三級和四級結構決定了它的物理、化學、生物化學、物理化學和生物學性質，綜述了不同蛋白質之間的性質存在差異或者改變條件是使之具有差異，利用一種同時多種性質差異，在兼顧收率和純度的情況下，選擇蛋白質提純的方法。

關鍵詞：蛋白質 分離純化

前言

蛋白質在組織或細胞中一般都是以復雜的混合物形式存在，每種類型的細胞都含有成千種不同的蛋白質。蛋白質的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務，到目前為止，還沒有一個單獨的或一套現成的方法能把任何一種蛋白質從復雜的混合物中提取出來，但對任何一種蛋白質都有可能選擇一套適當的分離提純程序來獲取高純度的制品。

蛋白質提純的總目標是設法增加制品純度或比活性，對純化的要求是以合理的效率、速度、收率和純度，將需要蛋白質從細胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中分離出來，同時仍保留有這種多肽的生物學活性和化學完整性。

能從成千上萬種蛋白質混合物中純化出一種蛋白質的原因，是不同的蛋白質在它們的許多物理、化學、物理化學和生物學性質有著極大的不同，這些性質是由于蛋白質的氨基酸的序列和數目不同造成的，連接在多肽主鏈上氨基酸殘基可是荷正電的、荷負電的、極性的或非極性的、親水的或疏水的，此外多肽可折疊成非常確定的二級結構（α螺旋、β折疊和各種轉角）、三級結構和四級結構，形成獨特的大小、形狀和殘基在蛋白質表面的分布狀況，利用待分離的蛋白質與其它蛋白質之間在性質的差異，即能設計出一組合理的分級分離步驟。

可依據蛋白質不同性質與之相對應的方法將蛋白質混合物分離：

1．分子大小

不同種類的蛋白質在分子大小方面有一定的差別，可用一些簡便的方法，使蛋白質混合物得到初步分離。

1．1透析和超濾

透析在純化中極為常用，可除去鹽類（脫鹽及置換緩沖液）、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。透析膜的截留分子量為5000左右，如分子量小于10000的酶液就有泄露的危險，在純化中極為常用，可除去鹽類、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。超濾一般用于濃縮和脫色

1．2離心分離置換緩沖液

許多酶富集于某一細胞器內，勻漿后離心得得到某一亞細胞成分，使酶富集10~20倍，再對特定的酶進行純化。差速離心，分辨率較低，僅適用于粗提或濃縮。速率區帶法，如離心時間太長所有的物質都會沉淀下來，故需選擇最佳分離時間，可得到相當純的亞細胞成分用于進一步純化，避免了差速離心中大小組分一起沉淀的問題，但容量較小，只能用于少量制備。等密度梯度離心常用的離主介質有蔗糖、聚蔗糖、氯化銫、溴化鉀、碘化鈉等等

1．3凝膠過濾

這是根據分子大小分離蛋白質混合物最有效的方法之一，注意使要離的蛋白質分子量落在凝膠的工作范圍內。選擇不同的分子量凝膠可用于脫鹽、置換緩沖液及利用分子量的差異除去熱源。